絕對定量的標準品如何制作?

說到標準品，我們先說說絕對定量：絕對定量是指在實時熒光定量PCR實驗中，對已知量的樣本進行連續(xù)稀釋后擴增，生成標準曲線。然后通過與此曲線比較，定量未知樣本，絕對定量可測定靶點的實際拷貝數(shù)。包括以下三個步驟：

（1）將標準品稀釋成不同濃度，作為模板進行擴增；

（2）以標準品拷貝數(shù)的對數(shù)值為橫坐標，以測得的Ct值為縱坐標繪制標準曲線；

（3）根據(jù)未知樣品的Ct值，即可在標準曲線中獲得樣品的拷貝數(shù)。

以上可以看出標準品之于絕對定量是非常非常重要的，那么標準品該怎樣選擇？

在GB/T22554-2010《基于標準樣品的線性校準》中注明標準樣品的組分需要與被測樣品組分一致。

標準品 既可以是含有目的基因的線性化質(zhì)粒DNA，也可以是比目的基因擴增片段長的純化后的PCR產(chǎn)物，或者基因組DNA和cDNA，但是需要作為標準品的核酸必須保證穩(wěn)定并且需要精準定量。并且由于核酸提取、逆轉錄等實驗過程可能會影響反應結果，所以需要注意標準品的實驗步驟應與實驗樣品盡可能相同。常用標準品包括：

DNA標準品

純化的PCR擴增片段或含有目的基因的克隆質(zhì)粒。

優(yōu)點：易制備，儲存穩(wěn)定；

缺點：缺少逆轉錄反應過程。

RNA標準品

目的基因的體外轉錄RNA。

優(yōu)點：結合逆轉錄反應過程；

缺點：制備時間長，不穩(wěn)定。

標準品的制備流程

如果是需要質(zhì)粒標準品的話建議咨詢我司直接購買！一步搞定省時省力！