化工儀器網(wǎng)
詳細介紹
公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！
貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 |
A-PJ1059 | TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase) | 1000U |
PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？
試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個引物，分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛，可增強PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實驗步驟，常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制；電泳槽：用于分離PCR擴增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動提取核酸。 這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進行PCR反應(yīng)并得出準確結(jié)果。
PCR相關(guān)基礎(chǔ)實驗：
PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈式反應(yīng)由20到35個循環(huán)組成，每個循環(huán)包括以下3個步驟：
一、變性：
利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前，通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。
二、退火或稱接合,復(fù)性：
在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯誤地結(jié)合。該步驟時間1-2分鐘。
三、延伸：
DNA聚合酶由降溫時結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：
1、變性溫度和時間：
保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。
2、復(fù)性溫度和時間:
PCR擴增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。
3、延伸溫度和時間:
一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時間，可根據(jù)待擴增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時間。這里需要注意，延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時間。
4、循環(huán)數(shù):
其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達到最大值，實際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴增增加。
公司正在出售的產(chǎn)品：
禽白血病病毒通用染料法熒光定量RT-PCR試劑盒 | 胞質(zhì)動力蛋白ELISA試劑盒 CD免費代測試劑 | 泰勒屬原蟲通用染料法熒光定量PCR試劑盒 |
球孢子菌通用PCR檢測試劑盒供應(yīng) | 單純皰疹病毒抗原-1ELISA試劑盒 HSV-Ag1免費代測試劑 | 小鼠乳腺瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書 |
布氏桿菌(BS)核檢測試劑盒 | 細胞周期G2ELISA試劑盒 | 馬蘇哈魚病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
猴痘病毒PCR檢測試劑盒 | 彈性蛋白2BELISA試劑盒 | 馬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
馬皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒 | 低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6ELISA試劑盒 | 諾氏梭狀桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒 |
芹菜源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒 | 丁型肝炎IgMELISA試劑盒 | 山羊痘病毒(GTPV)核檢測試劑盒 |
禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒 | 多巴胺β羥化ELISA試劑盒 | 前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒 |
馬皰疹病毒4型（EHV-IV）核檢測試劑盒 | 多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移9ELISA試劑盒 | 鏈球菌組PCR檢測試劑盒說明書 |
馬流感病毒HN型PCR檢測試劑盒 | 二氫嘧啶樣蛋白3ELISA試劑盒 | 牛膝染料法PCR鑒定試劑盒 |
腔闊盤吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 | 防御β103BELISA試劑盒 | 馬乳頭瘤病毒PCR檢測試劑盒 |
痢疾桿菌PCR檢測試劑盒（熒光PCR法） | 人端粒保護蛋白1(POT1)ELISA試劑盒 | 七星庫道蟲PCR檢測試劑盒 |
牛種特異性基因PCR檢測試劑盒（熒光PCR法） | 人基膜聚糖/內(nèi)腔蛋白(LUM)ELISA檢測試劑盒 | 蓋塔病毒染料法熒光定量RT-PCR染料法熒光定量PCR試劑盒 |
產(chǎn)氣腸桿菌染料法熒光定量PCR試劑盒 | TdT末端轉(zhuǎn)移酶(Terminal Transferase)人超敏熱休克蛋白70(HSP-70)試劑盒ELISA | 單胞菌通用PCR檢測試劑盒 |
卡他莫拉菌PCR檢測試劑盒 | 人α-烯醇化(ENO1/ENO1L1/MBPB1/MPB1)檢測試劑盒elisa | 節(jié)片代凡絳蟲探針法熒光定量PCR試劑盒 |
牡蠣皰疹病毒(OsHV)核檢測試劑盒 | 人成骨生長肽(OGP) ELISA Kit | 羌蟲病立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒 |
化工儀器網(wǎng)