鏈霉親和素磁珠

鏈霉親和素磁珠公司正在出售的產(chǎn)品：人胰腺癌細(xì)胞　脊髓灰質(zhì)炎受體相關(guān)蛋白1封閉多肽　雞傳染性喉氣管炎病毒即禽皰疹病毒型PCR檢測試劑盒　大鼠抗心磷脂抗體IgA(ACA-IgA)ELISA檢測試劑盒　半胱氨（Cys）含量活性比色法檢測試劑盒　粉紅單端孢　RAS癌基因家族蛋白RAB40C抗體

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

鏈霉親和素磁珠是一種高度均勻的超順磁性微球，表面包覆著高密度的超純鏈霉親和素（＞97%）。微球經(jīng)過專門設(shè)計(jì)、測試和質(zhì)量控制，可用于免疫沉淀、細(xì)胞分選、快速單步捕獲生物su化分子，如 DNA、RNA、抗體或細(xì)胞裂解物或雜交反應(yīng)中的蛋白質(zhì)等。鏈霉親和素（或抗生素多倍體）和生物su之間的相互作用表現(xiàn)出已知的最高非共價(jià)相互作用之一?？股飐u、鏈霉親和素、單體抗生物su及其類似物已成為探針和親和配體的有力工具，在生化分析、診斷、親和純化和藥物傳遞等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用。鏈霉親和素是一種四聚體生物su結(jié)合蛋白，源于鏈霉菌親和素 II，質(zhì)量為 60000 道爾頓。鏈霉親和素不含碳水化合物，pI 較低，非特異性結(jié)合程度較低，使鏈霉親和素成為許多檢測系統(tǒng)的理想試劑選擇。

產(chǎn)品特點(diǎn): 使用鏈霉親和素-生物su結(jié)合系統(tǒng)的優(yōu)點(diǎn)和益處：

·親和力：鏈霉親和素是同源四聚體，具有較高的生物su結(jié)合親和力，具有KD~10?14 米。

·高穩(wěn)定性：生物su結(jié)合復(fù)合物具有優(yōu)異的穩(wěn)定性，可抵抗 pH、溫度（2°C 和40°C）、苛刻的有機(jī)溶劑、變性劑（如氯化胍）、洗滌劑（如 SDS）和蛋白水解酶。

·突出的選擇性和特異性：生物su和鏈霉親和素的相互作用具有高度的特異性，確保了較低的非特異性結(jié)合。

·高靈敏度：高穩(wěn)定性和特異性確保了高檢測靈敏度。

·非常靈活：生物su的小尺寸和顯著穩(wěn)定性被證明非常適合相對容易地并入各種分子，例如合成聚合物、熒光團(tuán)、小分子或生物分子中的特定位置，從而對共軛生物分子的結(jié)構(gòu)和功能施加最小的擾動(dòng)。

鏈霉親和素磁性微球的優(yōu)點(diǎn)：

·快速、簡單且一步到位的高通量程序：消除了柱狀物或過濾器，或重復(fù)費(fèi)力的移液或 離心（圖 1） ·高結(jié)合能力 ·表現(xiàn)出較低的非特異性結(jié)合 ·可擴(kuò)展-可輕松調(diào)整樣本大小和自動(dòng)化

所需材料 ·

Binding Buffer: 1x PBS, 0.1% BSA, pH 7.4 ·磁力分離器（適用于手動(dòng)操作）： 根據(jù)實(shí)驗(yàn)時(shí)生物樣品的體積，使用者可以選擇以下不同型號的磁力分離器： 8孔磁力架 可以容納8個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml 離心管 ; 24孔磁力架可以容納24個(gè)單獨(dú)的1.5-2.0 ml離心管; 4孔磁力-15可以容納 4個(gè)單獨(dú)的15ml離心管; 4孔磁力架-50可以容納四個(gè)單獨(dú)的50 ml離心 管。

操作過程：

注: · 該方案是一種通用親和純化程序。為了獲得最佳結(jié)果，每個(gè)用戶應(yīng)確定純化單個(gè)目標(biāo)蛋白的最佳工作條件。

·根據(jù)粗樣品中目標(biāo)生物su化分子的數(shù)量（基于珠子結(jié)合能力），優(yōu)化每種應(yīng)用中使用的珠子數(shù)量。使用過多的磁珠會導(dǎo)致背景較高，而使用過少的磁珠會導(dǎo)致產(chǎn)量較低。

1. 將最佳量的珠子轉(zhuǎn)移到離心管中。將管放在磁力架上1-3分鐘。在管留在分離器上的同時(shí)去除上清液。

2. 取下試管，用5倍體積的 1x Binding/Washing Buffer通過渦流清洗珠子30秒。將試管置于室溫下1-3分鐘。將管放在磁力架上1-3分鐘。在管留在分離器上的同時(shí)去除上清液。

3. 重復(fù)步驟二兩次。

向含有目標(biāo)分子的粗樣品中加入洗滌過的珠子，并在室溫或所需溫度下培養(yǎng)1-2小時(shí)（溫度越低，培養(yǎng)時(shí)間越長）。

注: 強(qiáng)烈建議進(jìn)行滴定以優(yōu)化培養(yǎng)時(shí)間。更長時(shí)間的孵育可能導(dǎo)致更高的背景。

4. 如步驟 2 所述清洗磁珠，直到 280 nm 處洗脫液的吸光度接近背景水平（OD280<0.05）。

注: 添加更高濃度的鹽、非離子洗滌劑和還原劑可降低非特異性背景。例如，向洗滌緩沖液中添加NaCl（高達(dá)1-1.5 M）、0.1-0.5%的非離子洗滌劑，如Triton X 100或吐溫20。

PCR 反應(yīng)需要使用哪些試劑和設(shè)備？

試劑:
模板DNA：PCR反應(yīng)需要模板DNA，如從細(xì)胞、組織、血液中提取DNA等；引物：PCR反應(yīng)的兩個(gè)引物，分別與模板DNA的兩端配對擴(kuò)增所需的特定區(qū)域，引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物；dNTPs：PCR反應(yīng)中需要四種dNTPs，包括脫氧腺苷酸（dATP）、脫氧胸苷酸（dCTP）、脫氧鳥苷酸（dGTP）、脫氧胞嘧啶酸（dTTP），用于細(xì)胞分裂、DNA合成等生物學(xué)過程，用于PCR擴(kuò)增的模板DNA鏈的延伸和擴(kuò)增；Taq DNA聚合酶：PCR反應(yīng)需要的聚合酶，一般使用Taq聚合酶，還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等，用于擴(kuò)增DNA鏈；PCR buffer溶液：對PCR反應(yīng)具有緩沖作用，調(diào)節(jié)反應(yīng)pH，硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機(jī)化合物如甲醛，可增強(qiáng)PCR反應(yīng)特異性，從而提高反應(yīng)效率；酶切體系：PCR擴(kuò)增往往涉及到重組、構(gòu)建和測序等等實(shí)驗(yàn)步驟，常常需要進(jìn)行酶切操作。MARK:一種分子量標(biāo)準(zhǔn)，用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒：用于純化PCR反應(yīng)產(chǎn)物；
設(shè)備：
PCR儀：用于控制反應(yīng)溫度，保證PCR反應(yīng)時(shí)不同溫度環(huán)節(jié)的嚴(yán)格控制；電泳槽：用于分離PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；核酸提取儀：從組織樣本中全自動(dòng)提取核酸。  這些試劑和設(shè)備在PCR分子生物學(xué)技術(shù)中均是，只有在有序齊全的基礎(chǔ)上，才能進(jìn)行PCR反應(yīng)并得出準(zhǔn)確結(jié)果。

PCR相關(guān)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)：

PCR反應(yīng)基本步驟一般的聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)由20到35個(gè)循環(huán)組成，每個(gè)循環(huán)包括以下3個(gè)步驟：

一、變性：

利用高溫（93-98℃）使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個(gè)循環(huán)之前，通常加熱長一些時(shí)間以確保模板和引物分離，僅以單鏈形式存在。該步驟時(shí)間1-2分鐘，接下來PCR儀就控制溫度進(jìn)入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復(fù)性：

在DNA雙鏈分離后，降低溫度使得引物可以結(jié)合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點(diǎn)5℃。錯(cuò)誤的退火溫度可能導(dǎo)致引物不與模板結(jié)合或者錯(cuò)誤地結(jié)合。該步驟時(shí)間1-2分鐘。

三、延伸：

DNA聚合酶由降溫時(shí)結(jié)合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補(bǔ)鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時(shí)間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計(jì)合成1000bp/min、較新的Tbr（來自于嗜熱菌Thermus brockianus）約40秒、商業(yè)公司生產(chǎn)的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應(yīng)條件優(yōu)化：

1、變性溫度和時(shí)間：

保證模板DNA解鏈?zhǔn)潜ＷC整個(gè)PCR擴(kuò)增成功的關(guān)鍵。加熱90~95°C, 30~60s，再復(fù)雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時(shí)間過長，可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復(fù)性溫度和時(shí)間:

PCR擴(kuò)增特異性取決于復(fù)性過程中引物與模板的結(jié)合。復(fù)性溫度越高，產(chǎn)物特異性越高。復(fù)性溫度越低，產(chǎn)物特異性越低。需根據(jù)引物的Tm值具體設(shè)定。

3、延伸溫度和時(shí)間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個(gè)核苷酸時(shí)，過高的延伸溫度不利于引物與模板的結(jié)合，可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應(yīng)時(shí)間，可根據(jù)待擴(kuò)增片段的長度而定，小于1kb, 1min足夠；大于1kb需加長延伸時(shí)間。Taq酶可根據(jù)1kb/min增加時(shí)間。這里需要注意，延伸時(shí)間過長可能出現(xiàn)非特異擴(kuò)增。因此需要設(shè)置恰到好處的延伸時(shí)間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后，PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后，PCR產(chǎn)物的積累即可達(dá)到最大值，實(shí)際操作中由于每步反應(yīng)的產(chǎn)率不可能達(dá)到100%，因此不管模板濃度是多少，20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多，非特異擴(kuò)增增加。

公司正在出售的產(chǎn)品：