兔ELISA試劑盒采用競(jìng)爭(zhēng)elisa方法，在微孔板包被有右旋糖酐偶聯(lián)抗原，加入右旋糖酐標(biāo)準(zhǔn)品或樣品，游離右旋糖酐與微孔條上預(yù)包被的右旋糖酐偶聯(lián)抗原互相競(jìng)爭(zhēng)抗右旋糖酐抗體酶標(biāo)記物，用TMB底物顯色，加入終止液后顏色由藍(lán)色變?yōu)辄S色，用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下進(jìn)行檢測(cè)，吸光值與樣品中右旋糖酐含量成反比，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)計(jì)算樣品中右旋糖酐的含量。兔ELISA試劑盒檢測(cè)種屬：人、大小鼠、兔、羊、猴、豬、豚鼠ELISA檢測(cè)試劑盒等

　　一、樣品收集、處理及保存：

　　1、細(xì)胞培養(yǎng)上清：適用于檢測(cè)體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無(wú)菌管收集細(xì)胞上清液，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

　　2、細(xì)胞：用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次，調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104

　　-106/ml 左右，通過(guò)反復(fù)凍融，使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份，或者細(xì)胞超聲粉碎，離心取上清液檢測(cè)。

　　3、血清：在室溫下，血液自然凝固，以1000×g離心15分鐘，取上清待測(cè)。

　　4、血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合后靜置10-20 分鐘后，以1000×g離心15分鐘，收集上

　　清。

　　5、體液：包括胸腹水、腦脊液，分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集，以1000×g離心15分鐘，收集上清。

　　6、組織標(biāo)本：切取組織標(biāo)本，稱(chēng)取重量0、5mg，加入500ul 的PBS，用手工或勻漿器，或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿，以2000-3000

　　rmp離心20 分鐘，收集上清進(jìn)行檢測(cè)。

　　7、樣品中不能含有NaN3，因NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的（HRP）活性。

　　8、保存：如果樣品不能立即檢測(cè)，應(yīng)將其分裝，-70 ℃保存，避免反復(fù)冷凍。保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀，應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

　　二、操作步驟：

　　1、標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)罕驹噭┖刑峁┰稑?biāo)準(zhǔn)品一支，用戶(hù)可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。

　　2、加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。

　　3、溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

　　4、配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

　　5、洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

　　6、加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。

　　7、溫育：操作同3。

　　8、洗滌：操作同5。

　　9、顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘。

　　10、終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。

　　11、測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。