上海淳麥生物科技有限公司

Y187感受態(tài)細(xì)胞說明書

時(shí)間：2019-10-7閱讀：1008
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Y187酵母感受態(tài)細(xì)胞基因型：

MATα, ura3-52, his3-200, ade 2-101,  trp 1-901, leu 2-3, 112, gal4Δ, met–, gal80Δ, URA3 : : GAL1UAS-GAL1TATA-lacZ, MEL1


Y187酵母感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說明：
Y187菌株是Clontech公司開發(fā)的GAL4系統(tǒng)酵母單雜，雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株，MATα型，可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)?；蚺cMATa型酵母菌株（Y2HGold，AH109等）通過mating操作進(jìn)行篩庫(kù)試驗(yàn)。
Transformation  marker為: trp1, leu2，報(bào)告基因?yàn)椋?/span>lacZ, MEL1。
Y187 -GAL4酵母雙雜系統(tǒng)需要兩種質(zhì)粒配套使用：PGBKT7和PGADT7。
質(zhì)粒PGBKT7的篩選標(biāo)志為TRP1，用于表達(dá)DNA-BD(來自酵母轉(zhuǎn)錄因子GAL4N端1~ 174位氨基酸)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白；
Y187酵母感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

  1.  取100 μl冰上融化的Y187感受態(tài)細(xì)胞，依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5ug，Carrier DNA（95-100度5min,快速冰浴，重復(fù)一次）10 ul ，PEG/LiAc  500ul并吸打幾次混勻，30度水浴30 分鐘（15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。
  2.  將管放42度水浴15min  （7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻）。 

3. 5000 rpm 離心 40s 棄上清，ddH2O 400ul 重懸，離心 30s 棄上清。
4. ddH2O 50ul重懸，涂板,29℃培養(yǎng)48-96h。

上海淳麥生物科技有限公司  感受態(tài)細(xì)胞培養(yǎng)專家  4006815880

 

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