EGY48酵母感受態(tài)細(xì)胞基因型:
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
EGY48酵母感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明:
EGY48菌株是Clontech公司開發(fā)的LexA 系統(tǒng)酵母雙雜實(shí)驗(yàn)用菌株,MATa型,可直接轉(zhuǎn)化質(zhì)粒進(jìn)行蛋白互作驗(yàn)證或篩庫(kù)試驗(yàn);Transformation marker為: his3, trp1, ura3,報(bào)告基因?yàn)椋篖EU2;報(bào)告基因UAS(上游激活序列)來(lái)源于LexA op(x6),只有當(dāng)Bait和Prey互作時(shí)才能啟動(dòng)LEU2表達(dá)。
EGY48-LexA酵母雙雜系統(tǒng)系統(tǒng)需要三種質(zhì)粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。
質(zhì)粒pLexA的篩選標(biāo)志為HIS3,用于表達(dá)DNA-BD(來(lái)自原核的202個(gè)氨基酸殘基組成的LexA蛋白)與目標(biāo)蛋白(Bait)的融合蛋白;
質(zhì)粒pB42AD的篩選標(biāo)志為TRP1,用于表達(dá)AD(來(lái)自皰疹病毒的88個(gè)氨基酸殘基組成的B42AD蛋白)與目標(biāo)蛋白(Prey)的融合蛋白;
報(bào)告質(zhì)粒p8op-LacZ的篩選標(biāo)志為URA3,報(bào)告基因?yàn)長(zhǎng)acZ,報(bào)告基因UAS來(lái)源于LexA op(x8) ,只有當(dāng)Bait和Prey互作時(shí)才能啟動(dòng)LacZ表達(dá)。 High5TM系列Y2HGold感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作,-80℃可保存三個(gè)月,經(jīng)PGBKT7質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率>104cfu/μg DNA 。
EGY48酵母感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明:
1. 取100 μl冰上融化的 EGY48感受態(tài)細(xì)胞,依次加入預(yù)冷的目的質(zhì)粒2-5ug,Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重復(fù)一次)10 ul ,PEG/LiAc 500ul并吸打幾次混勻,30度水浴30 分鐘(15 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
2.將管放42度水浴15min(7.5 min時(shí)翻轉(zhuǎn)6-8次混勻)。
3. 5000 rpm離心40s棄上清,ddH2O 400ul重懸,離心30s棄上清。
4.ddH2O 50ul重懸,涂板,29℃培養(yǎng)48-96h。
上海淳麥生物科技有限公司在感受態(tài)細(xì)胞的研發(fā)方面,實(shí)力雄厚,擁有了克隆、表達(dá)、酵母和農(nóng)桿菌4大類,共計(jì)百余種感受態(tài)細(xì)胞。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌和農(nóng)桿菌電擊感受態(tài)種類,極大提高了客戶在轉(zhuǎn)基因以及文庫(kù)構(gòu)建方面的成功率。