一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
細(xì)胞名稱 | 人腎小管上皮細(xì)胞 | |||
種屬來源 | 人 | |||
組織來源 | 腎臟 | |||
生長特性 | 貼壁生長 | |||
形態(tài)特征 | 上皮細(xì)胞樣 | |||
質(zhì)量檢測 | 廣譜角蛋白(PCK)或細(xì)胞角蛋白-18(CK-18)免疫熒光染色為陽性,純度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等 | |||
產(chǎn)品規(guī)格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 | |||
培養(yǎng)基 | 人原代腎小管上皮細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
換液頻率 | 每2-3天換液一次 | |||
消化液 | 0.25% | |||
產(chǎn)品貨期 | 7-8周左右 | |||
運輸方式 | T25培養(yǎng)瓶/順豐快遞(包郵) | |||
供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
背景介紹 | 人腎小管上皮細(xì)胞 采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來制備而來,人腎小管上皮細(xì)胞分離自腎組織;腎臟是機體的重要器官,它的基本功能是生成尿液,借以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)物及某些廢物、毒物,同時經(jīng)重吸收功能保留水份及其他有用物質(zhì),如葡萄糖、蛋白質(zhì)、氨基酸、鈉離子、鉀離子、等,以調(diào)節(jié)水、電解質(zhì)平衡及維護酸堿平衡。腎臟同時還有內(nèi)分泌功能,生成腎素、促紅細(xì)胞生成素、活性3、前列腺素、激肽等,又為機體部分內(nèi)分泌激素的降解場所和腎外激素的靶器官。腎臟的這些功能,保證了機體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,使新陳代謝得以正常進行。腎小管是機體腎臟器官上與腎小囊壁層相連的一條細(xì)長上皮性小管,具有重吸收(reabsorption)和排泌作用。腎小管按不同的形態(tài)結(jié)構(gòu)、分布位置和功能分成近端小管、髓袢和遠(yuǎn)端小管三部分;近端小管可分為直部和曲部,曲部也稱為近曲小管,位于皮質(zhì)迷路內(nèi),于腎小體附近高度蟠曲;遠(yuǎn)端小管曲部也稱為遠(yuǎn)曲小管,位于皮質(zhì)迷路內(nèi)。腎小管上皮細(xì)胞是腎小管外面的一層細(xì)胞,腎小管上皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)是研究腎臟疾病的一項重要技術(shù),目前該細(xì)胞分離方法有酶分離法、化學(xué)分離法篩網(wǎng)分離法、顯微解剖分離法、流式細(xì)胞儀分離法等。腎小管上皮細(xì)胞主要功能:①腎小管上皮細(xì)胞重吸收原尿中幾乎全部的葡萄糖和氨基酸;②排泌非營養(yǎng)物質(zhì)進入終尿;③細(xì)胞能分泌炎癥介質(zhì)如細(xì)胞因子和趨化因子,通過產(chǎn)生IL-8或直接趨化白細(xì)胞參與急性炎癥反應(yīng);④移植腎炎癥和新月體腎炎中PTEpiC表達(dá)IL-2R和MHC-Ⅱ類抗原,這說明腎小管上皮細(xì)胞參與腎免疫損傷的發(fā)生。隨著對腎間質(zhì)纖維化機制研究的日漸加深,腎小管上皮細(xì)胞(RTECs)在其中的作用日益被人們重視。因此,提供良好的腎小管上皮細(xì)胞模型,在腎小管間質(zhì)疾病的發(fā)病機制和治療藥物篩選的研究中是非常重要的。 | |||
二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨處理 | 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h,以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | |||
傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng) | |||
傳代代數(shù) | 可傳1-2代左右,建議收到細(xì)胞后盡快進行相關(guān)實驗 | |||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代,1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | |||
傳代方法 | 1.吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基,用PBS清洗細(xì)胞一次; 2.添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中,輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后,吸出多余消化液,37℃溫浴1-3min;倒置顯微鏡下觀察,待細(xì)胞回縮變圓后,再加入5ml培養(yǎng)基終止消化; 3.用吸管輕輕吹打混勻,按1:2比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代,然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL,置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng); 4.待細(xì)胞貼壁后,培養(yǎng)觀察;之后每2-3天換液一次新鮮的培養(yǎng)基。 | |||
備注:由于實驗所用試劑、操作環(huán)境及操作手法的不同,以上方法僅供各實驗室參考 客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話: 按 2,我們隨時給予解答。 | ||||
三、注意事項 | ||||
重要提醒 | 1.培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個月。 2.在細(xì)胞培養(yǎng)過程中,請注意保持無菌操作。 3.傳代培養(yǎng)過程中,消化時間不宜過長,否則會影響細(xì)胞貼壁及其生長狀態(tài)。 4.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 | |||
到貨須知 | 1.收到細(xì)胞后,首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā),細(xì)胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后,取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照),記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù));建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑?,部分?xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細(xì)胞的具體情況,以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書,了解細(xì)胞相關(guān)信息,如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等,確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題,責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
四、售后服務(wù) | ||||
重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題,細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等,重發(fā); 2.收到細(xì)胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā); 3.收到細(xì)胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā); 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后,絕大多數(shù)細(xì)胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā); 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,重發(fā); 6.細(xì)胞活性問題,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果,用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā); 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染,不重發(fā); 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好,不重發(fā); 4.細(xì)胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片,不重發(fā); 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā); 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā); 7.視具體情況而定。 |