| 一、細(xì)胞基本屬性 | ||||
| 細(xì)胞名稱 | NK-92人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞（STR鑒定正確） | |||
| 細(xì)胞別稱 | NK-92；人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞；NK-92 MI; NK-92 mi; NK92-MI; NK92MI; NK-92 transfected with MFG-Hil2 | |||
| 種屬來源 | 人 | |||
| 年齡性別 | 男；50歲 | |||
| 組織來源 | 淋巴 | |||
| 生長特性 | 懸浮生長 | |||
| 細(xì)胞形態(tài) | 淋巴母細(xì)胞樣 | |||
| 細(xì)胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
| 背景介紹 | NK-92是從一位患有急進(jìn)性非霍奇金淋巴瘤的50歲白人男性外周血單核細(xì)胞衍生來的一株白細(xì)胞介素-2依賴型NK細(xì)胞株。這株細(xì)胞對很多惡性細(xì)胞有細(xì)胞毒性；鉻釋放試驗顯示它能殺死K562和Daudi細(xì)胞。 NK-92細(xì)胞(經(jīng)過照射以防止增殖)可以有效地用于血液中白血病的體外免疫清掃而不危及血細(xì)胞的功能。NK-92細(xì)胞有以下特征： CD2, CD7, CD11a, CD28, CD45, CD54表面標(biāo)記陽性，CD56亮；CD1, CD3, CD4, CD5, CD8, CD10, CD14, CD16, CD19, CD20, CD23, CD34和HLA-DR表面標(biāo)記陰性。 | |||
| 注意事項 | NK-92細(xì)胞復(fù)蘇后需一周左右時間方可恢復(fù)狀態(tài)，凍存時密度盡量大些 | |||
| STR位點 | Amelogenin:X,Y；CSF1PO:11,12；D13S317:9,12；D16S539:11,12；D18S51:12,17；D21S11:31.2,32；D3S1358:15；D5S818:12,13；D7S820:10,11；D8S1179:12,15；FGA:20,22；PentaD:10,12；PentaE:12；TH01:6,9.3；TPOX:8；vWA:16,18 | |||
| STR鑒定圖片 |  | |||
| 流式鑒定 |  | |||
| 生物安全等級 | 2 | |||
| 細(xì)胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
| 支原體檢測 | 無 | |||
| 保藏機構(gòu) | ATCC; CRL-2408 ；中國典型培養(yǎng)物保藏中心細(xì)胞庫 | |||
| 培養(yǎng)基 | NK92專用培養(yǎng)基（已添加IL2） | |||
| 培養(yǎng)條件 | 氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃ | |||
| 凍存條件 | 10%DMSO+50%FBS+40%培養(yǎng)基，液氮儲存 | |||
| 倍增時間 | ~40-50 hours | |||
| 細(xì)胞貨期 | 現(xiàn)貨，1周左右 | |||
| 運輸方式 | 復(fù)蘇發(fā)貨（T25瓶免運輸費用）/ 凍存發(fā)貨（需加干冰運輸費用） 順豐快遞 | |||
| 供應(yīng)限制 | 于科學(xué)研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
| 特別說明 | 以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
| 二、細(xì)胞培養(yǎng)操作 | ||||
| 收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
| 收貨處理 | 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁，將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-3h，以便穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài) | 收到細(xì)胞后，需立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇 | ||
| 傳代密度 | 細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng) | 第二天換液并檢查細(xì)胞密度 | ||
| 傳代比例 | 傳代建議1：2傳代，1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細(xì)胞建議接種到6cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
| 傳代方法 | 搖晃培養(yǎng)瓶，使NK-92細(xì)胞粗略混勻，取NK-92細(xì)胞計數(shù)，按每毫升2-3x105個活細(xì)胞的細(xì)胞密度進(jìn)行全換液或半換液。每48 h傳一次。 | 37℃水浴融化后，750 rpm離心5 min，棄凍存液，加入培養(yǎng)基重懸，在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，起始密度為每毫升2-3x105個細(xì)胞 | ||
| 注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。 2.因運輸問題，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完，檢查凍存管是否融化，若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察，若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存； 2.為保證細(xì)胞的高存活率，收到產(chǎn)品后，請立即解凍復(fù)蘇細(xì)胞。 | ||
| 到貨須知 | 1.收到NK-92細(xì)胞后，首先觀察并拍照記錄細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，干冰運輸?shù)募?xì)胞檢查干冰是否揮發(fā)，細(xì)胞是否解凍，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后，取出細(xì)胞培養(yǎng)瓶，鏡檢、拍照（當(dāng)天以及第 2,3 天請拍照），記錄細(xì)胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務(wù)依據(jù))；建議細(xì)胞傳代培養(yǎng)后，定期拍照、記錄細(xì)胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑?，個別敏感細(xì)胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請及時和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由客戶自行承擔(dān)。 | |||
| 備注：客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以技術(shù)服務(wù)電話： 按 2，我們隨時給予解答。 | ||||
| 三、細(xì)胞凍存操作 | ||||
| 凍存液配方 | 無血清凍存液，液氮儲存 | |||
| 細(xì)胞密度 | 待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
| 凍存方法 | 凍存液：10%DMSO+50%FBS+40%培養(yǎng)基，細(xì)胞計數(shù)后，取1×106~1×107個細(xì)胞，750 rpm離心5 min，棄原培養(yǎng)基，加入1 mL凍存液，輕輕混勻，標(biāo)注封口后，放入凍存盒，置于-80℃24 h，再置于液氮氣象。 | |||
| 注意事項 | 1. IL-2分裝使用，避免反復(fù)凍融； 2. 先配置不培養(yǎng)基：用的時候再將IL-2加入培養(yǎng)基中； 3. 傳NK-92細(xì)胞時，細(xì)胞不能在培養(yǎng)箱外放太久，小于1 h； 4. 重懸NK-92細(xì)胞要輕柔，不要太劇烈； 5. 不要加抗菌素，若一定要加，就加1%的青； 6. 全換液比半換液好些，每48 h傳代一次； 7. 培養(yǎng)該細(xì)胞一定要IL-2 100-200 U/ml，IL-2濃度無需再增高，過高會影響NK-92細(xì)胞生長，也不能再降低，過低細(xì)胞會死亡 | |||
| 四、售后服務(wù) | ||||
| 重發(fā)標(biāo)準(zhǔn) | 1.細(xì)胞運輸途中遭遇的各種問題，細(xì)胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴(yán)重漏液等，重發(fā)； 2.收到細(xì)胞未開封，如出現(xiàn)污染狀況，重發(fā)； 3.收到細(xì)胞3天內(nèi)，發(fā)現(xiàn)污染問題，經(jīng)核實后，重發(fā)； 4.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 2 小時后，干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，絕大多數(shù)細(xì)胞未存活，經(jīng)核實后，重發(fā)； 5.常溫發(fā)貨的細(xì)胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細(xì)胞復(fù)蘇 2 天后，出現(xiàn)污染，經(jīng)核實后，重發(fā)； 6.細(xì)胞活性問題，請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結(jié)果，用臺盼藍(lán)染色法鑒定細(xì)胞活力，經(jīng)核實后，重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
| 不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細(xì)胞污染，不重發(fā)； 2.客戶嚴(yán)重操作失誤致細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 3.非我們推薦細(xì)胞培養(yǎng)體系致的細(xì)胞狀態(tài)不好，不重發(fā)； 4.細(xì)胞狀態(tài)不好，未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細(xì)胞狀態(tài)照片，不重發(fā)； 5.細(xì)胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題的，不重發(fā)； 6.收到細(xì)胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的，不重發(fā)； 7.視具體情況而定。 | |||
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