一、細胞基本屬性 | ||||
細胞名稱 | HK-2人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞(STR鑒定正確) | |||
細胞別稱 | Hk-2; HK2; Human Kidney-2;人腎皮質(zhì)近曲小管上皮細胞 | |||
種屬來源 | 人 | |||
年齡性別 | 成年 | |||
組織來源 | 腎臟,皮層,近小管 | |||
生長特性 | 貼壁生長 | |||
細胞形態(tài) | 上皮細胞樣 | |||
背景簡介 | HK-2細胞屬源于正常腎的近曲小管細胞,通過導入HPV-16 E6/E7基因而獲得永生化。將含有HPV-16 E6/E7基因的重組的逆轉錄病毒載體pLXSN 16 E6/E7轉染外生包裝細胞Psi-2;Psi-2細胞產(chǎn)生的病毒再去感染兼嗜性包裝細胞系PA317,最后將PA317細胞產(chǎn)生的病毒顆粒導入正常的腎皮質(zhì)近曲小管細胞。盡管pLXSN 16 E6/E7中含有抗性,但未用G418篩選轉導克隆。Southern和FISH分析顯示,HK-2細胞來源于單克隆。PCR檢測證實,HK-2細胞基因組中含有E6/E7基因。 | |||
STR位點信息 | Amelogenin: X,Y; CSF1PO: 13; D13S317: 9; D16S539: 11,12; D5S818: 12; D7S820: 10,11; THO1: 9; TPOX: 8,9; vWA: 17,18 | |||
STR鑒定位點圖 | ||||
細胞代數(shù) | 10代以內(nèi) | |||
生物安全等級 | 2 | |||
細胞規(guī)格 | 1×106cells/T25培養(yǎng)瓶或者1mL凍存管包裝 | |||
支原體檢測 | 無 | |||
保藏機構 | ATCC; CRL-2190 BCRC; 60097;中國典型培養(yǎng)物保藏中心細胞庫 | |||
培養(yǎng)基 | DMEM+10%FBS+PS+5ng/ml EGF | |||
培養(yǎng)條件 | 氣相:95%空氣+5%二氧化碳;溫度:37℃ | |||
凍存條件 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
受體表達情況 | epidermal growth factor (EGF), expressed | |||
基因表達情況 | alkaline phosphatase; gamma glutamyltranspeptidase; leucine aminopeptidase; acid phosphatase; cytokeratin; alpha 3, beta 1 integrin; fibronectin | |||
細胞貨期 | 現(xiàn)貨,1周左右 | |||
運輸方式 | 復蘇發(fā)貨(T25瓶免運輸費用)/ 凍存發(fā)貨(需加干冰運輸費用) 順豐快遞 | |||
供應限制 | 于科學研究,絕不可作為動物或人類疾病的治療產(chǎn)品使用 | |||
特別說明 | 以下細胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考,具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主 | |||
二、細胞培養(yǎng)操作 | ||||
收貨方式 | T25瓶 | 凍存管 | ||
收貨處理 | 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁,將T25瓶置于37度培養(yǎng)箱放置2-3h,以便穩(wěn)定細胞狀態(tài) | 收到細胞后,需立即轉入液氮凍存或直接復蘇 | ||
傳代密度 | 細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng) | 第三天換液并檢查細胞密度 | ||
傳代比例 | 傳代建議1:2傳代 1:2傳代就是1個T25瓶傳2個T25瓶或者2個6cm皿。不是1個T25瓶傳2個10cm皿 | 一管細胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶 | ||
傳代方法 | a、棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。 b、加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培養(yǎng)瓶中,使消化液浸潤所有細胞,將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1 -3min(視細胞消化情況而定),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中,1000 rpm離心5 min,棄去上清液,補加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。 c、將細胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 | 將含有1 mL細胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min,棄去上清液,加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤? cm皿中,加入約4 mL培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第三天換液并檢查細胞密度。 | ||
注意事項 | 1.運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。 2.因運輸問題,部分細胞由于溫度變化及劇烈碰亡破碎形成碎片,是正常現(xiàn)象。 | 1.收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細胞接種觀察,若未融化可以將細胞按正常步驟保存; 2.為保證細胞的高存活率,收到產(chǎn)品后,請立即解凍復蘇細胞。 | ||
到貨須知 | 1.收到細胞后,首先觀察并拍照記錄細胞瓶是否完好,培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象,干冰運輸?shù)募毎麢z查干冰是否揮發(fā),細胞是否解凍,若有上述現(xiàn)象發(fā)生請及時和我們聯(lián)系。 2.靜置完成后,取出細胞培養(yǎng)瓶,鏡檢、拍照(當天以及第 2,3 天請拍照),記錄細胞狀態(tài) (所拍照片將作為后續(xù)服務依據(jù));建議細胞傳代培養(yǎng)后,定期拍照、記錄細胞生長狀態(tài)。 3.由于運輸?shù)脑?,個別敏感細胞會出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況,請及時和我們聯(lián)系,告知細胞的具體情況,以便我們的技術人員跟蹤回訪直至問題解決。 4.仔細閱讀細胞說明書,了解細胞相關信息,如細胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細胞因子等,確保細胞培養(yǎng)條件一致,若由于培養(yǎng)條件不一致而導致細胞出現(xiàn)問題,責任由客戶自行承擔。 | |||
備注:客戶在細胞培養(yǎng)過程中,有任何技術問題可以技術服務電話: 按 2,我們隨時給予解答。 | ||||
三、細胞凍存操作 | ||||
凍存液配方 | 無血清凍存液,液氮儲存 | |||
細胞密度 | 待細胞生長狀態(tài)良好時,可進行細胞凍存。下面 T25 瓶為例 | |||
凍存方法 | a、收集細胞及細胞培養(yǎng)液,裝入無菌離心管中,1000 rpm條件下離心4 min,棄去上清液,用PBS清洗一遍,棄盡PBS,進行細胞計數(shù)。 b、根據(jù)細胞數(shù)量加入無血清細胞凍存液,使細胞密度5x106~1x107/mL,輕輕混勻,每支凍存管凍存1mL細胞懸液,注意凍存管做好標識。 c、將凍存管放入-80℃冰箱,24 h后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。 | |||
注意事項 | 凍存細胞轉入液氮后及時復蘇一管檢查細胞凍存活性,若有異常,及時調(diào)整實驗方案 | |||
四、售后服務 | ||||
重發(fā)標準 | 1.細胞運輸途中遭遇的各種問題,細胞丟失、瓶身破損、培養(yǎng)液嚴重漏液等,重發(fā); 2.收到細胞未開封,如出現(xiàn)污染狀況,重發(fā); 3.收到細胞3天內(nèi),發(fā)現(xiàn)污染問題,經(jīng)核實后,重發(fā); 4.常溫發(fā)貨的細胞靜置 2 小時后,干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,絕大多數(shù)細胞未存活,經(jīng)核實后,重發(fā); 5.常溫發(fā)貨的細胞靜置 22 小時并且未開封或干冰凍存發(fā)貨的細胞復蘇 2 天后,出現(xiàn)污染,經(jīng)核實后,重發(fā); 6.細胞活性問題,請在收到產(chǎn)品 3 天內(nèi)給我們提出真實的實驗結果,用臺盼藍染色法鑒定細胞活力,經(jīng)核實后,重發(fā); 7.視具體情況而定。 | |||
不予重發(fā) | 1.客戶操作造成細胞污染,不重發(fā); 2.客戶嚴重操作失誤致細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); 3.非我們推薦細胞培養(yǎng)體系致的細胞狀態(tài)不好,不重發(fā); 4.細胞狀態(tài)不好,未提供真實清晰的培養(yǎng)前 3 天的細胞狀態(tài)照片,不重發(fā); 5.細胞培養(yǎng)時經(jīng)其它處理導致細胞出現(xiàn)問題的,不重發(fā); 6.收到細胞發(fā)現(xiàn)問題與客服人員溝通的時間證明大于3天的,不重發(fā); 7.視具體情況而定。 | |||
五、參考文獻 | ||||
microRNA-338-3p suppresses lipopolysaccharide-induced inflammatory response in HK-2 cells. BMC Mol Cell Biol. 2022 Dec 23;23(1):60. doi: 10.1186/s12860-022-00455-0. PMID: 36564725; PMCID: PMC9789656. Silencing CDK6-AS1 inhibits LPS-induced inflammatory damage in HK-2 cells. Open Med (Wars). 2021 Aug 26;16(1):1256-1264. doi: 10.1515/med-2021-0314. PMID: 34514170; PMCID: PMC8395588. |