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EGY48酵母感受態(tài)細胞基因型:
MATα, ura3, his3, trp1, LexAop (x6)-LEU2
EGY48酵母感受態(tài)細胞簡要說明:
EGY48菌株是Clontech公司開發(fā)的LexA 系統(tǒng)酵母雙雜實驗用菌株,MATa型,可直接轉化質粒進行蛋白互作驗證或篩庫試驗;Transformation marker為: his3, trp1, ura3,報告基因為:LEU2;報告基因UAS(上游激活序列)來源于LexA op(x6),只有當Bait和Prey互作時才能啟動LEU2表達。
EGY48-LexA酵母雙雜系統(tǒng)系統(tǒng)需要三種質粒配套使用:pLexA、pB42AD、p8op-LacZ。
質粒pLexA的篩選標志為HIS3,用于表達DNA-BD(來自原核的202個氨基酸殘基組成的LexA蛋白)與目標蛋白(Bait)的融合蛋白;
質粒pB42AD的篩選標志為TRP1,用于表達AD(來自皰疹病毒的88個氨基酸殘基組成的B42AD蛋白)與目標蛋白(Prey)的融合蛋白;
報告質粒p8op-LacZ的篩選標志為URA3,報告基因為LacZ,報告基因UAS來源于LexA op(x8) ,只有當Bait和Prey互作時才能啟動LacZ表達。 High5TM系列Y2HGold感受態(tài)細胞經特殊工藝制作,-80℃可保存三個月,經PGBKT7質粒檢測轉化效率>104cfu/μg DNA 。
EGY48酵母感受態(tài)細胞操作說明:
1. 取100 μl冰上融化的 EGY48感受態(tài)細胞,依次加入預冷的目的質粒2-5ug,Carrier DNA(95-100度5min,快速冰浴,重復一次)10 ul ,PEG/LiAc 500ul并吸打幾次混勻,30度水浴30 分鐘(15 min時翻轉6-8次混勻)。
2.將管放42度水浴15min(7.5 min時翻轉6-8次混勻)。
3. 5000 rpm離心40s棄上清,ddH2O 400ul重懸,離心30s棄上清。
4.ddH2O 50ul重懸,涂板,29℃培養(yǎng)48-96h。
上海淳麥生物科技有限公司在感受態(tài)細胞的研發(fā)方面,實力雄厚,擁有了克隆、表達、酵母和農桿菌4大類,共計百余種感受態(tài)細胞。在電擊感受態(tài)方面,擁有了大腸桿菌和農桿菌電擊感受態(tài)種類,極大提高了客戶在轉基因以及文庫構建方面的成功率。
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