EPI400 感受態(tài)細(xì)胞

EPI400 Chemically Competent Cell



EPI400 感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ(ara, leu)7697 galU galK λ- rpsL (StrR) nupG trfA tonA pcnB4 dhfr

EPI400 感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：
EPI400 來(lái)源于 EC100 菌株，將 EC100 核基因中控制質(zhì)?？截悢?shù)的 pcnB 基因刪除后引入一個(gè)誘導(dǎo)啟動(dòng)子 驅(qū)動(dòng)的 pcnB 基因,即是 EPI100 菌株。EPI400 菌株可以降低質(zhì)粒的拷貝數(shù)，特別適合于各種不穩(wěn)定 DNA 或毒性基因的克隆，在加入誘導(dǎo)劑- CopyCutter Induction Solution 后又可以提高質(zhì)粒產(chǎn)量到正常狀 態(tài)。[mcrA,Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC)]基因型使 EPI400 菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的 DNA 。recA1 和 endA1 的突變有利于插入 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。lacZΔM15 標(biāo)記的存在 使 EPI400 可用于藍(lán)白斑篩選，tonA 賦予其抗噬菌體 T1 和 T5 的能力，rpsL 賦予其鏈霉素抗性。EPI400 感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率可達(dá) 5×107 cfu/μg DNA。

EPI400 感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：
1. EPI400 感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5 分鐘后待菌塊融化，加入目的 DNA（質(zhì)?；蜻B接 產(chǎn)物）并用手 EP 管底混勻，冰中靜置 25 分鐘。
2. 42℃水浴熱激 45 秒，迅速放回冰上并靜置 2 分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。
3. 向離心管中加入 700 μl 不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT 或 LB)，混勻后 37℃，200 rpm 復(fù)蘇 60 分 鐘。
4. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，留取 100 μl 左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的 2YT 或
1.LB 培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。如果進(jìn)行藍(lán)白斑篩選操作，將平板放 37℃培養(yǎng)至少 15 h。


EPI400 感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

2.  感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
3. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。