BJ5183 Electro
BJ5183 Electroporation-Competent Cell

BJ5183 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞基因型：


endA1sbcBCrecBCgalKmet thi-1bioThsdR(Strr)
BJ5183 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：

BJ5183 是一種具有較高重組活力的大腸桿菌菌株，是目前腺病毒系統(tǒng)常用的感受態(tài)細(xì)胞。--

BJ5183 菌株含有 sbcBCrecBC 雙重突變，賦予 BJ5183 細(xì)胞較強(qiáng)的重組能力，有利于轉(zhuǎn)入的目的基因與腺病毒質(zhì)粒

{pAdeasy-1[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3 deleted)]或 pAdeasy-2[encodes the Adenovirus-5 genome (E1/E3/E4 deleted)]}的重組。endA1（缺失核酸內(nèi)切酶）的突變有利于重組 DNA 的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒 DNA 的提取。Strr 賦予 BJ5183 菌株鏈霉素抗性。--
--BJ5183 電擊感受態(tài)細(xì)胞適用于普通質(zhì)粒和大質(zhì)粒的構(gòu)建，經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效 率>1010cfu/μg DNA。
BJ5183 電轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1. 0.1 cm 電擊杯和杯蓋從儲(chǔ)存液中拿出倒置于干凈的吸水紙上 5 分鐘，待其瀝干水分，正置 5 分鐘，使乙 醇充分揮

發(fā)，待乙醇揮發(fā)干凈立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面 0.5 cm 以方便蓋上杯蓋，冰中 靜置 5 分鐘充分降溫。 2. 取-80℃保存的 BJ5183 電擊感受態(tài)細(xì)胞插入冰中 5  分鐘，待其融化，加入目的 DNA (質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物) 并用手 EP 管底輕輕混勻，避免產(chǎn)生氣泡，立即插入冰中。 A. 測(cè)定轉(zhuǎn)化效率使用 1 μl 10 pg/μl 的對(duì)照質(zhì)粒 pUC19； B. 對(duì)于連接產(chǎn)物，請(qǐng)用乙醇沉淀 DNA 后加入適量 TE 緩沖液 (10 mM Tris HCl, pH7.5; 1 mM EDTA)重 懸，DNA 濃度 不超過(guò) 100 ng/μl，體積不超過(guò) 5 μl/50  μl 感受態(tài)。--
3. 用 200 μl 槍頭(用刀切除 0.5cm 槍尖)將感受態(tài)-DNA 混合物快速移到電擊杯中，避免產(chǎn)生氣泡，蓋上杯蓋。

4. 啟動(dòng)電轉(zhuǎn)儀，設(shè)置參數(shù)：C=25 μF，PC=200 Ω，V=1.8 kV (此為 BioRad 電轉(zhuǎn)儀推薦參數(shù)，也可按所用 電轉(zhuǎn)儀 推薦的參數(shù)操作），將電擊杯快速放入電轉(zhuǎn)槽中，電擊完成快速插入冰中。--
5. 2 分鐘后從冰中取出電擊杯，放室溫，加入 700 μl 不含抗生素的無(wú)菌 S.O.C. 培養(yǎng)基（室溫），用 1ml 槍吹吸電擊 杯底部數(shù)次混勻后，轉(zhuǎn)移到 50 ml 離心管（BD Falcon 50 ml 錐形離心管等），向離心管中 補(bǔ)加 S.O.C. 培養(yǎng)基至 10 ml。37℃，225 rpm 復(fù)蘇 60 分鐘。
6. 5000 rpm 離心一分鐘收菌，重懸后取 100-200 μl 涂布到含相應(yīng)抗生素的 S.O.C 平板上（因菌量較大， 若全部涂 板請(qǐng)選用直徑 15cm 培養(yǎng)皿 2-5 個(gè)）。將平板倒置放于 37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。