OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼：                        保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R)

 

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞簡要說明：

 OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞包含突變的硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表達(dá)主要還原途徑的兩個關(guān)鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強(qiáng)蛋白的可溶性。 
該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶），可同時表達(dá)T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質(zhì)粒的蛋白表達(dá)，具有卡那霉素和四環(huán)素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的表達(dá)。
OrigamiB (DE3) 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率達(dá)10⁸cfu/μg。
 
 

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

1.  取100μl冰上融化的OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

1.  將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.   感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒時應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
4.  誘導(dǎo)時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。
5.  為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

6. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性質(zhì)粒的表達(dá)。