BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞基因型：

F^- ompT hsdS(r_B^-m_B^-) gal dcm(DE3)pLysS Cam^r

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：

 BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞攜帶 pLysS質(zhì)粒，具有氯霉素抗性。
pLysS含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因，T7溶菌酶可以作用于大腸桿菌細(xì)胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)，適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。
該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶）， BL21(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)10⁸cfu/μg。
 

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1.  取100μl冰上融化的 L21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置 25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含34 µg/ml氯霉素及所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。

1. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

BL21(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.   感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。
4.  誘導(dǎo)時(shí)，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。
5.  為獲得需要量的蛋白，誘導(dǎo)時(shí)間，溫度，IPTG濃度需實(shí)驗(yàn)者優(yōu)化。

6. BL21(DE3)pLysS 菌株攜帶 pLysS質(zhì)粒，除復(fù)蘇培養(yǎng)基為無(wú)抗生素外，其余所用培養(yǎng)基、培養(yǎng)液均應(yīng)含有34 µg/ml氯霉素，以防質(zhì)粒丟失。

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