Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞

Rosetta-gami(DE3)pLysS Chemically Competent Cell

產(chǎn)品編碼：                       保存條件： -80℃   
產(chǎn)品規(guī)格:

Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞基因型：

Δ(ara-leu)7697ΔlacX74phoAPvuIIphoRaraD139ahpCgalEgalKrpsL(DE3)F[lac⁺lacI^qpro]gor522
::Tn10 trxB pLysSRARE2 (Cam^R , Str^R , Tet^R )

Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說明：

 High5^TM系列Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株聚合了不同原核表達(dá)菌株的優(yōu)勢(shì)：
＊ Rosetta-gami賦予其 Rosetta和Origami的優(yōu)點(diǎn)——補(bǔ)充大腸桿菌缺乏的6 種稀有密碼子(AUA， AGG， AGA， CUA，CCC， GGA) 對(duì)應(yīng)的tRNA，提高外源基因的表達(dá)水平，并且包含突變的硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表達(dá)主要還原途徑的兩個(gè)關(guān)鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強(qiáng)蛋白的可溶性。

＊ 該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶），適合T7啟動(dòng)子誘導(dǎo)的蛋白表達(dá)。

＊ 該菌株攜帶的pLysS質(zhì)粒含有表達(dá) T7 溶菌酶的基因，能夠降低目的基因的背景表達(dá)水平，但不干擾IPTG誘導(dǎo)的表達(dá)，適合表達(dá)毒性蛋白和非毒性蛋白。Rosetta-gami(DE3)pLysS 菌株具有卡那霉素，氯霉素，鏈霉素，四環(huán)素抗性，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率高達(dá)10⁸cfu/μg。

 

Rosetta-gami(DE3)pLysS感受態(tài)細(xì)胞操作說明：

1.  取100μl冰上融化的 Rosetta-gami(DE3)pLysS 感受態(tài)細(xì)胞，加入目的質(zhì)粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT 或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。