美國(guó)BTX細(xì)胞電融合/電穿孔儀ECM2001

ECM2001是一臺(tái)萬(wàn)能的細(xì)胞操作儀器，它綜合了電穿孔儀和電融合儀的特點(diǎn)，ECM2001在細(xì)胞融合時(shí)，分三個(gè)階段，預(yù)融合、融合、后融合階段．ECM2001在預(yù)融合時(shí)可產(chǎn)生一種*的高頻交流波，交流波將細(xì)胞排列成雙體或株璉，以便融合的進(jìn)行，提高了融合的效率。

融合階段：交流波和直流波的轉(zhuǎn)換之間設(shè)有微秒開(kāi)關(guān)，能在極短時(shí)間內(nèi)從交流電轉(zhuǎn)成直流電。在方波長(zhǎng)電波的作用下，使細(xì)胞高效融合，融合完成：ECM20

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應(yīng)用舉例

• 胚胎操作/核移植/動(dòng)物克隆 （系統(tǒng)：ECM2001/830）

核移植是將細(xì)胞核從供體轉(zhuǎn)入受體的過(guò)程。細(xì)胞核指導(dǎo)胚胎的發(fā)育，導(dǎo)致新生體安全出生?；罴?xì)胞分裂，形成胚胎。Meng等人（1997）將核移植技術(shù)擴(kuò)展至靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型，克隆出恒河猴。技術(shù)的進(jìn)步使研究人員能夠從分裂球進(jìn)展至更高分化的胚胎細(xì)胞以及靜止的胚兒細(xì)胞，作為核的供應(yīng)來(lái)源。胚胎產(chǎn)生的細(xì)胞在體外培養(yǎng)6-13代，然后在轉(zhuǎn)入前使用血清饑餓的方法使細(xì)胞靜止。如前文所述，Roble、Cibelli以及Stice是*次在1998年報(bào)告使用非老化胚成纖維細(xì)胞作為核的供體進(jìn)行核移植而產(chǎn)生綿羊克隆轉(zhuǎn)基因牛的人。IanWilmut在1996年震驚了整個(gè)世界，他從成年乳腺的細(xì)胞產(chǎn)生出*個(gè)動(dòng)物克隆——多利。使用分化的成年細(xì)胞進(jìn)行克隆的能力打開(kāi)了核移植廣泛運(yùn)用的大門即基因治療的令人激動(dòng)的模式。最近的成功事例PPLTherapeutics公司從成年體細(xì)胞克隆出豬。對(duì)于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合樣品池及微型載玻片。

• 動(dòng)物細(xì)胞融合 （系統(tǒng)：ECM2001）

腫瘤及樹(shù)突的電融合目前在過(guò)繼性免疫療法中進(jìn)行使用。腫瘤細(xì)胞本身不能作為良好的抗原提成細(xì)胞，因此不會(huì)刺激T細(xì)胞生長(zhǎng)。樹(shù)突細(xì)胞是已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的的抗原提呈細(xì)胞，在融合后可以將腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)變成抗原提呈細(xì)胞。刺激后比未融合腫瘤細(xì)胞至少增加100倍。對(duì)于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合附件及微型載玻片。

• 雜交瘤/細(xì)胞雜交瘤技術(shù) （系統(tǒng)：ECM2001）

在過(guò)去十年中，使用電融合技術(shù)進(jìn)行雜交瘤的產(chǎn)生及抗體大大增加。電融合的過(guò)程可以通過(guò)顯微鏡進(jìn)行觀察，與PEG相比需要的細(xì)胞數(shù)量較少。使用電融合用于這種用途還有無(wú)毒性及高效性的優(yōu)點(diǎn)。

Panova等人（1995）通過(guò)把人類B細(xì)胞與Heteromyeloma、Spam-8細(xì)胞進(jìn)行電融合增強(qiáng)了人類雜交瘤的生成。Kreutz等人（1998）引入了一種使用電融合及FACS分選的新方法產(chǎn)生細(xì)胞雜交瘤。Cao等人（1995）建立了另一種快速非選擇性方法通過(guò)電融合產(chǎn)生人類細(xì)胞雜交瘤。數(shù)據(jù)明確支持電融合用于這種重要目的的有效性。對(duì)于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合附件及微型載玻片。

• 植物原生質(zhì)的融合 （系統(tǒng)：ECM2001）

電融合可被用于融合植物原生質(zhì)以產(chǎn)生雜交體及創(chuàng)造具有所需特性的作物。Hofmann-Tsay等人（1994）試驗(yàn)了可以的融合促進(jìn)物質(zhì)，發(fā)現(xiàn)一些多聚物可以便利融合過(guò)程而不影響細(xì)胞新生。Chen等人（1995）將原生質(zhì)從2種種屬的Porphyria進(jìn)行融合，成功率高達(dá)85%。這些鼓舞人心的數(shù)生質(zhì)從2種種屬的Porphyria進(jìn)行融合，成功率高達(dá)85%。這些鼓舞人心的數(shù)據(jù)提示電融合與傳統(tǒng)的PEG融合方法相比，可以改善融合效率以及可重復(fù)性。對(duì)于這些用途可以使用多種細(xì)胞融合附件及微型載玻片。

>技術(shù)參數(shù)

交流參數(shù)：

*非正弦波形

頻率：1MHZ

電壓：0-75V

持續(xù)時(shí)間：0-99秒

直流參數(shù)：

方波型

高壓模式：10-3000V/10 V調(diào)進(jìn) --用于電穿孔及轉(zhuǎn)基因；

低壓模式：10-500V//10 V調(diào)進(jìn) --用于融合/核移植/胚胎操作

波長(zhǎng)范圍：0.01—0.99毫秒/0.01毫秒；1—99毫秒/1毫秒；1—99微秒/1微秒

脈沖次數(shù)：1-99次