雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒說明書

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上，實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素?？贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物（TMB），TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長處測OD值，抗原濃度與OD

雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

使用說明書

產(chǎn)品名稱

通用名：雞傳染性支氣管炎病毒抗體檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫法）

包裝規(guī)格

96T×1/盒

檢測原理

    本試劑盒由預(yù)包被雞傳染性支氣管炎病毒重組蛋白的酶標(biāo)板、酶標(biāo)記物及其他配套試劑組成，應(yīng)用酶聯(lián)免疫法（ELISA）原理檢測雞血清、血漿樣本中雞傳染性支氣管炎病毒抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)在酶標(biāo)板中加入對照血清和待檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有雞傳染性支氣管炎病毒抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后；再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合；再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶標(biāo)結(jié)合物反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān)；加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色；用酶標(biāo)儀在450nm波長測定各反應(yīng)孔中的吸光值，即可知樣品是否含有雞傳染性支氣管炎病毒抗體。

試劑盒組成

2～8℃保存，有效期12個(gè)月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個(gè)月。

適用儀器

含450nm波長的酶標(biāo)儀，37℃恒溫設(shè)備，可調(diào)微量移液器。

樣品準(zhǔn)備

1.取動物全血按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內(nèi)可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按50倍稀釋（如4μl血清加入196μl樣品稀釋液中，混勻）陰性、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水加1份濃縮洗滌液)。

檢驗(yàn)方法

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復(fù)至室溫。

2.取所需用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性、陽性對照各1孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰性、陽性對照孔分別加入陰性、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃溫箱孵育30分鐘。

5.甩去孔內(nèi)液體，每孔加300ul工作洗滌液，靜置60秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。

6.每孔加酶標(biāo)記物100μl，置37℃避光反應(yīng)30分鐘。

7.甩去孔內(nèi)液體，每孔加350ul工作洗滌液，靜置60秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，每次洗滌后需拍干液體。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，置37℃避光反應(yīng)10分鐘。

9.每孔加終止液100μl，混勻，空白孔調(diào)零后，于450nm 測定各孔吸光值（OD值），

參考值

實(shí)驗(yàn)正常的情況下，陽性對照OD-陰性對照OD＞0.2。

檢驗(yàn)結(jié)果的解釋

1. S/P＝(樣本OD-陰性對照OD)/(陽性對照OD-陰性對照OD)。

2. S/P≥0.4時(shí)結(jié)果判讀為陽性；0.2＜S/P＜0.4時(shí)結(jié)果考慮疑似感染；S/P＜0.2時(shí)結(jié)果判讀為陰性。

試驗(yàn)方法的局限性

1. 本試劑盒僅作為被檢對象是否感染雞傳染性支氣管炎病毒的初步評估,具體情況請結(jié)合臨床。

2. 本試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或人體實(shí)驗(yàn)。

注意事項(xiàng)

1.實(shí)驗(yàn)操作時(shí)需戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格健全和執(zhí)行消毒隔離制度，各種實(shí)驗(yàn)廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

2.終止液具有腐蝕性，應(yīng)避免接觸皮膚和衣物，如不慎接觸請立即用大量自來水沖洗。

3.酶標(biāo)板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)恢復(fù)至室溫方可開袋，未用完的酶標(biāo)板需放入有干燥劑的密封袋中保存。

4.濃縮洗滌液在低溫時(shí)容易結(jié)晶，使用時(shí)需恢復(fù)至室溫以*溶解。

5.洗滌時(shí)各孔均需加滿液體，防止孔口有游離酶不能洗凈。

6.用于檢測的樣品應(yīng)保持新鮮。

7.試驗(yàn)結(jié)果的判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

8.不同批號試劑組分不得混用。

生產(chǎn)企業(yè)

企業(yè)名稱：賽諾利康生物技術(shù)（北京）有限公司

地    址：北京市昌平區(qū)科技園超前路甲1號11號樓7層