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艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒

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  • 艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒
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    上海市

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更新時間:2023/03/08 19:59:03瀏覽次數(shù):866

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產品簡介

供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 48T
貨號 XK-PCR-1048 主要用途 科學研究
艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光PCR技術,設計一對艱難梭菌特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR 技術對艱難梭菌的核酸進行體外擴增檢測, 用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。在反應體系中含基因組模板的情況下,反應得以進行并釋放 熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結果的定性、定量分析。

詳細介紹

艱難梭菌(CD)熒光PCR核酸擴增檢測試劑盒說明書

【產品名稱】

通用名稱:艱難梭菌 (CD)核酸擴增檢測試劑盒(PCR 熒光探針法)

Name :Diagnostic Kit for Clostridium difficile DNA(PCR Fluorescence Probing)

【包裝規(guī)格】48T/盒

【預期用途】

本試劑盒適用于檢測水樣糞便等樣本中的艱難梭菌,用于艱難梭菌感染的輔助診斷,其檢測結果僅供參考。

【檢驗原理】

本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術,設計一對艱難梭菌特異性引物,結合一條特異性探針,用熒光PCR 技術對艱難梭菌的核酸進行體外擴增檢測, 用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

【試劑組成】

說明:不同批號的試劑盒組分不可交互使用。

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃,避光保存、運輸、反復凍融少于 7 次,有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

【標本采集】

取水樣便 0.5~1mL

【保存和運輸】

上述標本短期內可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個月,標本運送應采用 2~8℃冰袋運輸,嚴禁反復凍融。

【使用方法】

1. 樣品處理(樣本處理區(qū))

1.1 樣本前處理

13000rpm 離心 2min,去盡上清

1.2 DNA 提取

1) 對上述處理好的標本加入等體積核酸提取液(固體標本加入50μL核酸提取液), 100℃恒溫處理 10min,13,000 rpm 離心 5min,取上清液轉移至新的 1.5mL EP 管,-20℃保存;

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產的DNA提取試劑盒(離心柱提取法),請嚴格按照試劑盒說明書進行操作。

2. 試劑配制(試劑準備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設所需要的PCR 反應管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),每測試反應體系配制如下表:

3. 加樣(樣本處理區(qū))

將步驟 1 提取的 DNA、陽性質控品、陰性質控品各取 4μL,分別加入相應的反應管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

4. PCR 擴增(核酸擴增區(qū))

4.1 將待檢測反應管置于熒光定量 PCR 儀反應槽內;

4.2 設置好通道、樣品信息,反應體系設置為 25μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,請勿選擇 ROX 參比熒光。

5. 結果分析判定

5.1 結果分析條件設定

設置 Baseline 和 Threshold:一般直接按機器自動分析的結果分析,當曲線出現(xiàn)整體

傾斜時,根據(jù)分析后圖像調節(jié)Baseline 的 start 值(一般可在 3~15 范圍內調節(jié))、stop

值(一般可在 5~20 范圍內調節(jié)),以及 Threshold 的 Value 值(上下拖動閾值線至高于陰性對照),重新分析結果。

5.2 結果判斷

陽性:檢測通道 Ct 值≤35.0,且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑:檢測通道 Ct 值>35.0,且出現(xiàn)典型擴增曲線的樣本建議重復試驗,重復試驗

結果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴增曲線者為陽性,否則為陰性。

陰性:樣本檢測結果無 Ct 值且無明顯的擴增曲線。

6. 檢測方法的局限性

1)樣本檢測結果與樣本收集、處理、運送以及保存質量有關;

2)樣本提取過程中沒有控制好交叉污染,會出現(xiàn)假陽性結果;

3)陽性對照、擴增產物泄漏,會導致假陽性結果;

4)病原體在流行過程中基因突變、重組,會導致假陰性結果;

5)不同的提取方法存在提取效率差異,會導致假陰性結果;

6)試劑運輸,保存不當或試劑配制不準確引起的試劑檢測效能下降,出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準確的結果;

7)本檢測結果僅供參考,如須確診請結合臨床癥狀以及其他檢測手段。

7. 質控標準

陰性質控品:無明顯擴增曲線或無 Ct 值顯示;

陽性質控品:擴增曲線有明顯指數(shù)生長期,且 Ct 值≤32; 以

上條件應同時滿足,否則實驗視為無效。

8. 產品性能指標

陰陽性參考品符合率:5 份陽性參考品符合率為 100%;10 份陰性參考品符合率為

100%。

低檢測限:1.0×10 3copies/mL。

精密度:批內、批間精密度檢測 Ct 值的變異系數(shù)(CV)均小于等于 3%。

【注意事項】

1)所有操作嚴格按照說明書進行;

2)試劑盒內各種組分使用前應自然融化,*混勻并短暫離心;

3)反應液應避光保存;

4)反應中盡量避免氣泡存在,管蓋需蓋緊;

5)使用一次性吸頭、一次性手套和各區(qū)工作服;

6)樣本處理、試劑配制、加樣需在不同區(qū)進行,以免交叉污染;

7)實驗完畢后用 10%次氯酸或 75%酒精或紫外燈處理工作臺和移液器;

8)試劑盒里所有物品應視為污染物對待,并按照《微生物生物醫(yī)學實驗室生物安全 通則》進行處理。

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