一、什么是色譜呢?

色譜的本質(zhì)是一種分離分析方法。常見(jiàn)的分離方法有蒸餾、離心、電泳、過(guò)濾等。色譜是目前有效的分離方法之一。

色譜法的原理：

利用混合物中各組份在不同的兩相中溶解、分配、吸附等性質(zhì)的差異，當(dāng)兩相作相對(duì)運(yùn)動(dòng)時(shí)，使各組分在兩相中反復(fù)多次受到各作用力而達(dá)到相互分離。

兩相中有一相是固定的，叫作固定相(Stationary Phase)，有一相是流動(dòng)的，稱(chēng)為流動(dòng)相(phase)，流動(dòng)相又叫洗脫劑、溶劑。

相(Phase)：物理化學(xué)術(shù)語(yǔ)，特指在某一系統(tǒng)中，具有相同成分及相同物理、化學(xué)性質(zhì)的均勻物質(zhì)。各相之間有明顯可分的界面。

二、液相色譜儀的組成

1、輸液系統(tǒng)

包括溶劑柜、真空脫氣機(jī)、溶劑混合器、高壓泵等，其中核心部分是泵；泵的作用提供足夠的驅(qū)動(dòng)力使流動(dòng)相通過(guò)填充緊密的色譜柱。

洗脫方式也分為兩種：

（1）等度洗脫：在同一分析周期內(nèi)流動(dòng)相組成保持恒定，適合于組分?jǐn)?shù)目較少，性質(zhì)差別不大的樣品。

（2）梯度洗脫：采用兩種（或多種）不同極性的溶劑，在分離過(guò)程中按一定程序連續(xù)改變流動(dòng)相的濃度配比和極性的一種洗脫模式。用于分析組分?jǐn)?shù)目多、性質(zhì)差異較大的復(fù)雜樣品。

2、進(jìn)樣系統(tǒng)

把分析試樣有效地送入色譜柱進(jìn)行分離。一般有自動(dòng)進(jìn)樣器和手動(dòng)進(jìn)樣器，進(jìn)樣量應(yīng)不小于定量環(huán)體積的5-10倍（少3倍）。

3、分離系統(tǒng)

主要是色譜柱，色譜柱是一根裝滿填料的管子。色譜柱的材料有不銹鋼、塑料、玻璃等，其尺寸（內(nèi)徑、長(zhǎng)短）不盡相同；色譜柱填料主要有硅膠基質(zhì)和聚合物基質(zhì)，填料的粒徑不盡相同。

4、檢測(cè)器

對(duì)檢測(cè)器的要求：靈敏度高、重現(xiàn)性好、線性范圍寬、死體積小、對(duì)溫度及流量的變化不敏感等。主要有紫外檢測(cè)器、熒光檢測(cè)器、示差檢測(cè)器等。

示差檢測(cè)器是一種通用型檢測(cè)器，理論上可以檢測(cè)幾乎所有的化合物。其原理是基于含樣品的洗脫劑和洗脫劑二者折光指數(shù)的差異。示差檢測(cè)器受壓力變化、溫度變化、流動(dòng)脈沖的影響較大，不適合進(jìn)行梯度洗脫。

三、液相色譜儀操作流程

1、開(kāi)機(jī)：依次打開(kāi)脫氣機(jī)、色譜泵、檢測(cè)器、計(jì)算機(jī)電源；待各設(shè)備自檢正常后，啟動(dòng)色譜管理系統(tǒng)。

2、流動(dòng)相準(zhǔn)備：過(guò)濾，脫氣。

3、色譜泵排氣

4、安裝色譜柱

5、平衡流動(dòng)相（有機(jī)溶劑與緩沖鹽溶液切換時(shí)等易產(chǎn)生沉淀，需先使用90%超純水/10%甲醇作為流動(dòng)相沖洗系統(tǒng)）

6、數(shù)據(jù)采集、進(jìn)樣

7、沖洗管路及色譜柱

8、數(shù)據(jù)處理

9、關(guān)機(jī)

10、記錄相關(guān)信息

四、液相色譜圖名詞術(shù)語(yǔ)

色譜峰(Peak):色譜柱流出組分通過(guò)檢測(cè)器時(shí)產(chǎn)生的響應(yīng)信號(hào)。

峰底(Peak Base):峰的起點(diǎn)與終點(diǎn)之間連接的直線。

峰高(Peak Height):峰大值到峰底的距離。

切線峰寬(Peak Width):在峰兩側(cè)拐點(diǎn)處所作切線與峰底相交兩點(diǎn)之間的距離。

半(高)峰寬(Peak Width at Half Height):通過(guò)峰高的中點(diǎn)作平行于峰底的直線，其與峰兩側(cè)相交兩點(diǎn)之間的距離。

峰面積(Peak Area):峰與峰底之間的面積，又稱(chēng)響應(yīng)值。