細(xì)胞爬片的特點(diǎn)、注意事項(xiàng)及操作步驟

　　細(xì)胞爬片的特點(diǎn)、注意事項(xiàng)及操作步驟

　　爬片又名細(xì)胞爬片，是指讓玻片浸在細(xì)胞培養(yǎng)基內(nèi)，細(xì)胞在玻片上生長(zhǎng)，主要用于組織學(xué)，免疫組織huaxue，冰凍切片，細(xì)胞涂片，原位雜交等。

　　特點(diǎn)：

　　1.玻片表面經(jīng)過(guò)TC處理，雙面均可使用.

　　2.γ射線(xiàn)滅菌,保證無(wú)菌.

　　3.使用便捷,只需打開(kāi)包裝,將爬片放入孔板內(nèi),將細(xì)胞懸液滴到爬片上即可培養(yǎng).

　　4.爬片厚度為0.17mm,直徑為8mm/14mm/20mm/25mm.分別適用于48孔細(xì)胞培養(yǎng)板/24孔細(xì)胞培養(yǎng)板/12孔細(xì)胞培養(yǎng)板/6孔細(xì)胞培養(yǎng)板

　　5.吸附：該玻片表面具有持久的陽(yáng)離子電荷,可以通過(guò)靜電作用吸附冰凍切片組織或細(xì)胞,使之粘附在玻片上,進(jìn)而在玻璃和切片組織之間形成共價(jià)鍵.因此，無(wú)需粘黏劑或者蛋白包被，該玻片也能牢固的粘附切片或細(xì)胞。

　　操作注意事項(xiàng)：

　　使用細(xì)胞爬片時(shí)(比如在六孔板中放入爬片,六孔板的孔底面積往往會(huì)比爬片面積多出一部分,加細(xì)胞懸液時(shí)常常就是細(xì)胞鋪滿(mǎn)整個(gè)孔底,有時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)邊集現(xiàn)象,就是靠近壁邊緣密度要高些,這樣處于中央玻片上爬的細(xì)胞數(shù)量就可能相對(duì)較少)

　　比較好的做法是將玻片放入孔板的孔內(nèi)后,加細(xì)胞懸液時(shí)只滴到玻片上,一直滴到液體布滿(mǎn)整個(gè)玻片又不會(huì)溢出玻片邊緣(因?yàn)橐后w表面張力作用可以很容易做到這一點(diǎn)。),放在培養(yǎng)箱里,等細(xì)胞貼壁后,取出,再滴加培養(yǎng)基布滿(mǎn)整個(gè)孔底,繼續(xù)培養(yǎng),這樣玻片上的細(xì)胞生長(zhǎng)的密度就會(huì)很集中。

　　保存方式：

　　細(xì)胞爬片有三層包裝,在超凈臺(tái)無(wú)菌的狀態(tài)下打開(kāi)包裝.未用完的爬片按原先包裝方式再包裝起來(lái)即可。

　　注：

　　該爬片表面帶有正電荷,請(qǐng)勿用手觸摸,以免使用效果不佳。

　　玻片經(jīng)過(guò)γ射線(xiàn)滅菌后,透明玻片顏色會(huì)略變?yōu)榈枭?屬正常現(xiàn)象。

　　操作步驟：

　　爬片的準(zhǔn)備

　　1、在超凈臺(tái)內(nèi)，使用75%乙醇擦拭外包裝鋁箔袋

　　2、拆開(kāi)鋁箔袋，取出內(nèi)置器皿后，用尖鑷將內(nèi)置爬片取出放入所用或培養(yǎng)皿內(nèi)。

　　種植細(xì)胞

　　1、用胰酶消化好細(xì)胞，充分吹打，使之成單細(xì)胞懸液(注意：這一點(diǎn)很重要，關(guān)系到將來(lái)爬出來(lái)片子的質(zhì)量)

　　2、種植細(xì)胞時(shí)，根據(jù)玻片的大小，先在每個(gè)孔里準(zhǔn)備放爬片的位置滴少量培養(yǎng)基，目的是使玻片與培養(yǎng)皿靠培養(yǎng)基的張力粘合到一起，然后放玻片，防止加細(xì)胞懸液時(shí)玻片漂起，造成雙層細(xì)胞貼片。整個(gè)過(guò)程注意無(wú)菌操作。

　　3、根據(jù)自己的需要選擇合適的細(xì)胞密度種入培養(yǎng)板內(nèi)即可

　　注意事項(xiàng)

　　1、使用細(xì)胞爬片時(shí)，(比如在6孔板鐘放入爬片，6孔板的孔底面積往往比爬片面積多出一部分，加細(xì)胞懸液時(shí)，常常就是細(xì)胞鋪滿(mǎn)整個(gè)孔底，有時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)邊集現(xiàn)象，就是靠近壁邊緣細(xì)胞密度要高一些，這樣處于中央細(xì)胞爬片上的細(xì)胞數(shù)量相對(duì)較少)，比較好的做法是，將爬片放入孔內(nèi)后，加細(xì)胞懸液時(shí)，只滴到爬片上，一直滴到液體布滿(mǎn)整個(gè)爬片，但又不易溢出爬片邊緣，放到培養(yǎng)箱里，等細(xì)胞貼壁后，取出，再滴加培養(yǎng)基布滿(mǎn)整個(gè)孔底，繼續(xù)培養(yǎng)，這樣爬片上的細(xì)胞生長(zhǎng)的密度就會(huì)很集中。

　　2、細(xì)胞放到爬片上，之后加任何試劑，都應(yīng)沿培養(yǎng)板板壁少量一點(diǎn)點(diǎn)倒入液體，直到細(xì)胞被液體淹沒(méi)，盡量不要把細(xì)胞沖到細(xì)胞爬片以外!

　　3、爬片表面帶有正電荷，請(qǐng)勿用手觸摸，以免效果不佳!

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