Elisa操作—加顯A顯B 過(guò)程

　　ELISA試劑盒是一種常用于生物分子檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)工具，中文簡(jiǎn)稱(chēng)酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)。ELISA試劑盒通常包括特定抗體、酶標(biāo)記的二抗、底物等多種生化試劑，可用于檢測(cè)血清、尿液、唾液、細(xì)胞、組織等生物樣品中的蛋白質(zhì)、肽、荷爾蒙、抗體、細(xì)胞因子、病毒等生物分子。該技術(shù)廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、環(huán)境科學(xué)等領(lǐng)域。

　　產(chǎn)品特點(diǎn)

　　1、高效、靈敏、特異的抗體;

　　2、穩(wěn)定的重復(fù)性和可靠性;

　　3、吸附性能好，空白值低，孔底透明度高的固相載體;

　　4、適用血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、尿液等等多種標(biāo)本類(lèi)型;

　　5、節(jié)省實(shí)驗(yàn)經(jīng)費(fèi)。

　　ELISA操作步驟

　　1、包被：用PH9.6的CBS包被液稀釋包被抗原至5μg/ml，酶標(biāo)板中每孔加入50μl，室溫、4℃或37℃過(guò)夜包被。

　　2、洗滌：棄包被液(用力拍干，再用無(wú)塵紙吸干)，用PH7.2-7.4的1×PBST洗滌液洗板3次(每孔均要加滿)，每次3min~5min。

　　3、封閉：每孔加封閉液(1%BSA)250μl，37℃封閉2h。

　　4、洗滌：用1×PBST洗滌液洗板3次，每次3min~5min。

　　5、結(jié)合一抗：用1×PBST緩沖液1∶1000稀釋被檢血清，每孔100μl，要設(shè)立陰性對(duì)照，37℃孵育1.5h。

　　6、洗滌：同上。

　　7、結(jié)合酶標(biāo)二抗：每孔加1×PBST緩沖液1000倍稀釋的酶標(biāo)二抗羊抗鼠IgG-HRP(稀釋倍數(shù)根據(jù)產(chǎn)品不同有所不同，可按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行)50μl，37℃孵育1h。

　　8、洗滌：同上。

　　9、顯色：每孔加底物溶液(TMB)50μl，置室溫避光顯色10min。

　　10、待顯色后，每孔加入50μl終止液(2mol/L H2SO4)終止反應(yīng)。使用酶標(biāo)儀讀取450nm的OD值，以確定血清抗體水平。