Cas14a1核酸酶介紹與應(yīng)用

Cas14a1核酸酶是一種內(nèi)切核酸酶，其在tracrRNA:crRNA（或sgRNA）的引導(dǎo)下，特異結(jié)合并切割靶標(biāo)ssDNA，且無(wú)需PAM位點(diǎn)。相比于其他的Cas蛋白，Cas14蛋白的分子量普遍較?。?00-700AA），其中，上?；菡\(chéng)生物提供的Cas14a1的分子量?jī)H為為64.9 kd（含有3.4 k的N端標(biāo)簽序列）。與Cas12類(lèi)似，Cas14a1也可以結(jié)合靶標(biāo)核酸并激活其ssDNA反式切割活性，從而被應(yīng)用于靶標(biāo)核酸的分子檢測(cè)。然而，與Cas12不同的是，Cas14a1只能結(jié)合ssDNA靶標(biāo)，因此：經(jīng)過(guò)擴(kuò)增富集的靶標(biāo)核酸需使用T7核酸外切酶進(jìn)行處理，且其中一條擴(kuò)增引物需要實(shí)驗(yàn)磷硫酰化修飾以確保T7核酸外切酶僅切割其中一條鏈，從而留下ssDNA靶標(biāo)鏈以用于Cas14a1介導(dǎo)的分子檢測(cè)。上?；菡\(chéng)生物優(yōu)勢(shì)提供CRISPR基因編輯系列。

正對(duì)照反式切割結(jié)果：