Blue-Gal與IPTG聯(lián)合用于藍(lán)/白斑篩選技術(shù)原理和應(yīng)用

分子克隆實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)中常見的一個實(shí)驗(yàn)。感興趣的基因插入到表達(dá)載體中，而后轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主內(nèi)，但是并非所有質(zhì)粒都包含目的基因，怎樣篩查出包含有目的基因的菌落呢？藍(lán)白斑篩選法可能是使用最為廣泛的用來篩選含插入片段的目的菌落的方法。

Blue-Gal與IPTG可聯(lián)合用于分子生物學(xué)中的藍(lán)白斑篩選技術(shù)。Blue-Gal與IPTG聯(lián)合應(yīng)用實(shí)現(xiàn)了lacZ基因在大腸桿菌中的有效表達(dá)，基于藍(lán)斑的形成檢測了啟動子活性、蛋白結(jié)合以及核苷酸變異，為重組DNA技術(shù)提供了重要工具，在分子生物學(xué)研究中有較廣泛應(yīng)用。

規(guī)格參數(shù)：

HGS-01045 5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 Blue-Gal Bluo-Gal 97753-82-7

HA21014 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG 367-93-1 1g/5g 30元/85元

Blue-Gal與IPTG聯(lián)合使用原理：

IPTG作為lac操縱子的誘導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)含lac操縱子的重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達(dá)。Blue-Gal作為lacZ報告基因的底物，在其表達(dá)時可被β-半乳糖苷酶水解，生成藍(lán)色產(chǎn)物，產(chǎn)生藍(lán)斑。沒有l(wèi)acZ表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)物保持白色，產(chǎn)生白斑。通過藍(lán)白斑的對比，可檢測重組質(zhì)粒的表達(dá)與否。

Blue-Gal與IPTG聯(lián)合使用的應(yīng)用：

(1)重組質(zhì)粒的篩選

將含有不同序列的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)并與Blue-Gal作用，通過藍(lán)白斑的形成判斷哪些質(zhì)粒表達(dá)了lacZ，實(shí)現(xiàn)正向篩選。

(2)啟動子活性的檢測

將不同啟動子控制的lacZ報告基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)并與Blue-Gal反應(yīng)，啟動子活性越高的，藍(lán)斑出現(xiàn)越多，用于評價啟動子的活性強(qiáng)弱。

(3)變異體的篩選

將lacZ作為報告基因的重組質(zhì)粒隨機(jī)誘變后轉(zhuǎn)入大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)并與Blue-Gal作用，檢測藍(lán)斑消失的變異菌株，找出影響基因表達(dá)的重要區(qū)段或關(guān)鍵核苷酸。

(4)蛋白相互作用的檢測

在兩個蛋白質(zhì)之間克隆lacZ，使兩蛋白的相互作用可導(dǎo)致lacZ表達(dá)。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，在不同條件下IPTG誘導(dǎo)并Blue-Gal染色，檢測藍(lán)斑的形成與消失，判斷兩蛋白的相互作用與結(jié)合。