Blue-Gal與IPTG聯(lián)合用于藍(lán)/白斑篩選技術(shù)原理和應(yīng)用

分子克隆實(shí)驗(yàn)是分子生物學(xué)中常見(jiàn)的一個(gè)實(shí)驗(yàn)。感興趣的基因插入到表達(dá)載體中，而后轉(zhuǎn)化進(jìn)入宿主內(nèi)，但是并非所有質(zhì)粒都包含目的基因，怎樣篩查出包含有目的基因的菌落呢？藍(lán)白斑篩選法可能是使用最為廣泛的用來(lái)篩選含插入片段的目的菌落的方法。

Blue-Gal與IPTG可聯(lián)合用于分子生物學(xué)中的藍(lán)白斑篩選技術(shù)。Blue-Gal與IPTG聯(lián)合應(yīng)用實(shí)現(xiàn)了lacZ基因在大腸桿菌中的有效表達(dá)，基于藍(lán)斑的形成檢測(cè)了啟動(dòng)子活性、蛋白結(jié)合以及核苷酸變異，為重組DNA技術(shù)提供了重要工具，在分子生物學(xué)研究中有較廣泛應(yīng)用。

規(guī)格參數(shù)：

HGS-01045 5-溴-3-吲哚-β-D-吡喃半乳糖苷 Blue-Gal Bluo-Gal 97753-82-7

HA21014 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 IPTG 367-93-1 1g/5g 30元/85元

Blue-Gal與IPTG聯(lián)合使用原理：

IPTG作為lac操縱子的誘導(dǎo)劑，可誘導(dǎo)含lac操縱子的重組質(zhì)粒在大腸桿菌中的表達(dá)。Blue-Gal作為lacZ報(bào)告基因的底物，在其表達(dá)時(shí)可被β-半乳糖苷酶水解，生成藍(lán)色產(chǎn)物，產(chǎn)生藍(lán)斑。沒(méi)有l(wèi)acZ表達(dá)的細(xì)菌培養(yǎng)物保持白色，產(chǎn)生白斑。通過(guò)藍(lán)白斑的對(duì)比，可檢測(cè)重組質(zhì)粒的表達(dá)與否。

Blue-Gal與IPTG聯(lián)合使用的應(yīng)用：

(1)重組質(zhì)粒的篩選

將含有不同序列的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)并與Blue-Gal作用，通過(guò)藍(lán)白斑的形成判斷哪些質(zhì)粒表達(dá)了lacZ，實(shí)現(xiàn)正向篩選。

(2)啟動(dòng)子活性的檢測(cè)

將不同啟動(dòng)子控制的lacZ報(bào)告基因重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)并與Blue-Gal反應(yīng)，啟動(dòng)子活性越高的，藍(lán)斑出現(xiàn)越多，用于評(píng)價(jià)啟動(dòng)子的活性強(qiáng)弱。

(3)變異體的篩選

將lacZ作為報(bào)告基因的重組質(zhì)粒隨機(jī)誘變后轉(zhuǎn)入大腸桿菌，IPTG誘導(dǎo)并與Blue-Gal作用，檢測(cè)藍(lán)斑消失的變異菌株，找出影響基因表達(dá)的重要區(qū)段或關(guān)鍵核苷酸。

(4)蛋白相互作用的檢測(cè)

在兩個(gè)蛋白質(zhì)之間克隆lacZ，使兩蛋白的相互作用可導(dǎo)致lacZ表達(dá)。將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，在不同條件下IPTG誘導(dǎo)并Blue-Gal染色，檢測(cè)藍(lán)斑的形成與消失，判斷兩蛋白的相互作用與結(jié)合。