兩種粒徑免疫比濁微球提高靈敏度和線性范圍的原理

免疫比濁法是一種基于抗原-抗體特異性結(jié)合反應(yīng)的定量免疫分析方法。將待測(cè)抗原樣品與其對(duì)應(yīng)的抗體在適當(dāng)條件下混合反應(yīng)，抗原與抗體結(jié)合形成沉淀，使反應(yīng)溶液濁度增加，通過(guò)測(cè)定溶液濁度的變化來(lái)定量分析抗原。使用兩種不同粒徑的免疫比濁微球聯(lián)合用于免疫比濁技術(shù)，通過(guò)優(yōu)化各實(shí)驗(yàn)條件可以有效提高方法的靈敏度、準(zhǔn)確度和線性范圍。在研發(fā)聯(lián)用兩種微球的免疫比濁方法時(shí)，需要考慮不同微球在性質(zhì)、修飾和免疫反應(yīng)條件上的差異，選擇最佳的條件使兩種微球發(fā)揮最大的優(yōu)勢(shì)，同時(shí)也要防止兩種微球在檢測(cè)中的相互影響。

產(chǎn)品參數(shù)：

可給工業(yè)客戶贈(zèng)送樣品，提供10ml/100ml/1l/5L/10L等大規(guī)格，歡迎咨詢。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

 羧基分布更加均勻，羧基手臂鏈更長(zhǎng)

 微球表面極度親水，大大降低非特異吸附

 徹(空格)底免清洗，可拿來(lái)超聲后直接偶聯(lián)

 批生產(chǎn)能力100L，性能穩(wěn)定，批間差小，有效期可達(dá)5年以上

 可接受客戶定制和項(xiàng)目外包合作，幫助企業(yè)實(shí)現(xiàn)原料自主化

 更高的靈敏度和更寬的線性范圍

可提供整體解決方案

產(chǎn)品參數(shù)：

 材質(zhì):聚苯乙烯

 尺寸:50nm-500nm

 折射率:1.59(589nm波長(zhǎng)，25℃)

 密度:1.05g/cm3

 分散介質(zhì):純水(含有少量表面活性劑和防腐劑)

 基團(tuán)密度:50-286μeq/g(可定制)

 儲(chǔ)存條件:2-30℃ 保存，切勿凍融

免疫比濁法靈敏度和線性范圍主要受以下幾個(gè)因素的影響

1. 抗原濃度

抗原的種類和濃度直接決定了比濁反應(yīng)的強(qiáng)度，抗原濃度越高，反應(yīng)強(qiáng)度越大，檢測(cè)靈敏度越高。但過(guò)高的抗原濃度也會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)系統(tǒng)飽和，失去線性關(guān)系。

2. 抗體濃度

一定濃度范圍內(nèi)，抗體濃度越高，與抗原的結(jié)合機(jī)會(huì)越多，沉淀強(qiáng)度越大，檢測(cè)靈敏度越高。但過(guò)量的抗體也會(huì)產(chǎn)生抗體自身聚合的非特異反應(yīng),影響線性范圍。

3. 抗體親和力

親和力越高的抗體，與抗原的結(jié)合程度越強(qiáng)，產(chǎn)生的比濁信號(hào)也越強(qiáng)，檢測(cè)靈敏度越高。高親和力抗體也常用于提高檢測(cè)線性范圍。

4. 抗體種類

單克隆抗體與多克隆抗體相比，其與抗原的特異性結(jié)合更強(qiáng)，產(chǎn)生的比濁信號(hào)更大，檢測(cè)靈敏度更高。但線性范圍較小。聚缺口抗體可提高線性范圍。

5. 試劑稀釋倍數(shù)

在一定范圍內(nèi)，試劑倍數(shù)越高，反應(yīng)物濃度越大，檢測(cè)靈敏度越高。但過(guò)高會(huì)超出線性范圍，產(chǎn)生 Hook 效應(yīng)。

6. 反應(yīng)時(shí)間

適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間，有利于抗原與抗體之間的結(jié)合，增強(qiáng)比濁信號(hào)，提高檢測(cè)靈敏度。但過(guò)長(zhǎng)時(shí)間也會(huì)超出線性范圍。

7. 反應(yīng)溫度

在一定范圍內(nèi)，溫度升高有利于抗原與抗體結(jié)合，提高檢測(cè)靈敏度。但過(guò)高溫度會(huì)使酶或熒光標(biāo)記物不穩(wěn)定，縮小線性范圍。

兩種不同粒徑免疫比濁微球有效提高靈敏度和線性范圍的技術(shù)原理

1. 不同粒徑的微球具有不同的比表面積，小粒徑微球的比表面積更大，有利于生物識(shí)別分子的吸附或偶聯(lián)，可以提高微球與目標(biāo)分析物的結(jié)合效率，從而提高方法的靈敏度。

2. 不同粒徑微球阻礙光線通過(guò)的程度不同，小粒徑微球?qū)饩€的阻礙更小，有利于在低濃度下產(chǎn)生可檢測(cè)的吸光度變化，有利于提高檢出限和下限。

3. 不同粒徑微球在免疫反應(yīng)中的沉降速率不同，小粒徑微球的沉降速率更慢，有利于免疫反應(yīng)的進(jìn)行，獲得更高的結(jié)合效率，提高靈敏度。

4. 不同粒徑微球可與不同濃度范圍的目標(biāo)分析物產(chǎn)生最佳的免疫反應(yīng)，小粒徑微球與低濃度分析物，大粒徑微球與高濃度分析物的結(jié)合效果更佳。所以聯(lián)用可擴(kuò)展方法的線性范圍。

5. 分別使用不同粒徑微球可以分別建立其對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，在一定濃度范圍內(nèi)選擇最佳的標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行樣品的定量分析，提高結(jié)果的準(zhǔn)確度。