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HTRF(均質(zhì)時(shí)間分辨熒光)是一種免洗技術(shù),用來(lái)檢測(cè)純液相體系中待測(cè)物,是一款高通量藥物篩選利器。。它將標(biāo)準(zhǔn)熒光共振能量轉(zhuǎn)移FRET技術(shù)與時(shí)間分辨熒光TRF測(cè)量相結(jié)合,消除了短暫的背景熒光。對(duì)于夾心試驗(yàn),使用兩種識(shí)別感興趣蛋白質(zhì)的抗體,其中一種抗體與供體結(jié)合,另一種與受體結(jié)合。如果2個(gè)抗體識(shí)別分析物,供體激發(fā)時(shí)會(huì)發(fā)出熒光,能量會(huì)轉(zhuǎn)移到附近的受體,從而產(chǎn)生特定的受體熒光。供體熒光也被測(cè)量,并與受體熒光的比率被應(yīng)用。
HTRF技術(shù)測(cè)定如何工作?
HTRF只需要幾個(gè)步驟:
將分析物或樣品添加到微孔板中;
添加檢測(cè)試劑:抗分析物偶聯(lián)供體和受體偶聯(lián)抗體;
孵育2小時(shí)(某些化驗(yàn)可達(dá)一夜);
在HTRF兼容或認(rèn)證的微孔板閱讀器上讀取該分析。由受體發(fā)出的光將與相互作用的水平成比例。
HTRF技術(shù)優(yōu)勢(shì):
1.操作簡(jiǎn)單:空板直接加樣;加完即可檢測(cè);時(shí)間短加樣和孵育2h;
2.適合珍貴樣本:整個(gè)實(shí)驗(yàn)體系只需20ul;
3.均相檢測(cè):無(wú)需包被;免洗 ELISA;省時(shí)省力;
4.體系穩(wěn)定:7天內(nèi)可隨時(shí)檢測(cè);信號(hào)基本不變;
5.數(shù)據(jù)客觀真實(shí):比值處理可有效去除背景熒光;假陽(yáng)性率和價(jià)陰性率低;
6.高(空格)端檢測(cè):只需簡(jiǎn)單的酶標(biāo)儀就可以輕松搞定。
應(yīng)用:
HTRF已被證明在各種應(yīng)用中,包括GPCRs,激酶,表觀遺傳學(xué),PPIs和包括細(xì)胞因子在內(nèi)的廣泛生物標(biāo)志物的量化。
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