生物上游工藝常用設(shè)備,試劑和耗材

生物上游工藝是從細(xì)胞系開(kāi)發(fā)和培養(yǎng)到采集細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增培養(yǎng)等一系列生物工藝的第一階段。

生物上游工藝包括：目的基因獲取、載體構(gòu)建、載體轉(zhuǎn)化、重組子篩選(細(xì)胞分析)、培養(yǎng)擴(kuò)增。

目的基因獲取通常有下面幾種方式：

(1)鳥(niǎo)(空格)槍法 （2）染色體DNA的限制性內(nèi)切酶酶解 （3）人工體外合成 （4）用逆轉(zhuǎn)錄酶制備cDNA （5）PCR技術(shù)

載體構(gòu)建常用載體有如下幾種：（1）質(zhì)粒 （2）噬菌體DNA （3）柯斯（Cos）質(zhì)粒

目的基因獲取和載體構(gòu)建過(guò)程中常用設(shè)備有：

PCR儀、電泳儀、基因片段分析儀、凝膠成像系統(tǒng)、干浴器、組合式恒溫?fù)u床、電轉(zhuǎn)儀、超微量分光光度計(jì)、高通量蛋白/核酸濃度粒度分析儀、掃描電子顯微鏡、高通量微量核酸濃度分析儀

載體轉(zhuǎn)化中引入寄主細(xì)胞常用兩種方法：

（1）轉(zhuǎn)化（2）轉(zhuǎn)導(dǎo)。實(shí)驗(yàn)室常用的轉(zhuǎn)化方法有下面兩種：（1）化學(xué)轉(zhuǎn)化法（2）電轉(zhuǎn)化法

載體轉(zhuǎn)化過(guò)程中常用設(shè)備有：

CO2培養(yǎng)箱、水浴鍋、電轉(zhuǎn)儀、熒光倒置顯微鏡、單細(xì)胞分選儀、單克隆細(xì)胞成像驗(yàn)證系統(tǒng)、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀、細(xì)胞滲透壓儀、超微量分光光度計(jì)、酶標(biāo)儀、洗板機(jī)、移液工作站

重組子篩選方法有：

平板篩選、顯色篩選、DNA篩選。

平板篩選包括：

（1）抗生素平板篩選（2）插入失活。

DNA篩選包括：

（1）凝膠電泳分析 （2）限制性核酸內(nèi)切酶酶切分析（3）利用PCR方法篩選重組子

重組子篩選過(guò)程中細(xì)胞分析常用設(shè)備：

熒光倒置顯微鏡、單細(xì)胞組織解離器、細(xì)胞磁珠分選、單克隆細(xì)胞成像驗(yàn)證系統(tǒng)、洗板機(jī)、移液工作站、全自動(dòng)細(xì)胞熒光分析儀、小動(dòng)物活體成像

培養(yǎng)擴(kuò)增時(shí)，傳統(tǒng)上，整個(gè)細(xì)胞擴(kuò)增過(guò)程大約需要三到四個(gè)星期，從將一小瓶活細(xì)胞轉(zhuǎn)移到一系列搖瓶中開(kāi)始。

培養(yǎng)擴(kuò)增過(guò)程中常用設(shè)備：

CO2培養(yǎng)箱、生物反應(yīng)器組合式CO2搖床、細(xì)胞生物反應(yīng)器細(xì)胞滲透壓儀、蠕動(dòng)泵、倒置顯微鏡、過(guò)濾杯、手持拉曼、除菌過(guò)濾、平板過(guò)濾器、無(wú)菌儲(chǔ)液袋。

除上述設(shè)備外，常用公用設(shè)備包括：

純化水系統(tǒng)、超純水機(jī)、空壓機(jī)、恒溫循環(huán)系統(tǒng)溫濕度連續(xù)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)。

常用通用設(shè)備包括：

天平、磁力攪拌器、分散機(jī)、渦旋振蕩器、頂置式攪拌器、水浴鍋、烘箱、離心機(jī)、超聲波清洗機(jī)、實(shí)驗(yàn)室洗瓶機(jī)、全自動(dòng)均質(zhì)機(jī)、超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)、pH計(jì)、生物安全柜、凈氣型通風(fēng)柜、冰箱、恒溫培養(yǎng)箱、制冰機(jī)微生物培養(yǎng)箱恒溫恒濕箱。

生物上游工藝中常用試劑：

血清、培養(yǎng)基、胰酶、大提試劑盒、PCR試劑、通用生化試劑等。

生物上游工藝中常用耗材：

細(xì)胞培養(yǎng)瓶、細(xì)胞工廠、移液器、吸頭、白金硅膠管、針頭過(guò)濾器、凍存管、凍存盒、方瓶、離心管、細(xì)胞培養(yǎng)板、移液管等。