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瓊脂糖預染預制膠電泳試劑盒使用過程中可能出現(xiàn)一些問題,比如:如何選擇預制膠濃度,選擇什么體系,Marker條帶電泳清晰但樣品電泳很差,回收低,掛孔和圖像不好等原因,惠誠生物針對推出的該款預制膠進行解答。
1、如何選擇預制膠濃度?
不同分子量對應的預制膠濃度,實驗情況很復雜,下表僅供參考:
2、能不能使用其他體系?
目前這款預制膠使用體系為TAE,不能在其他體系(如TBE/TPE)的電泳液中電泳;
3、Marker條帶電泳清晰,樣品電泳很差?
一般情況是樣本的問題,因為膠只是一個平臺,不改變核酸的結構和形態(tài),具體解決方案如下:
A、調整電壓(一般降低);B、減少上樣量或者稀釋;C、用新的制備樣品;D、調整PCR 的條件(如退火溫度)等等。
4、為什么回收低?
若回收低,需要調高熔膠溫度和延長熔膠時間,具體原因如下:
A、膠是0.7cm 厚的標準膠,比用戶自配的膠在切膠的位置厚很多,因此在切膠的過程中切的膠要比自配的膠多;
B、膠孔比用戶原來自己的孔寬一點點,用戶在切膠的過程中也會比自配的膠切的多。
這樣的話,用戶使用他們原來的習慣,在相同的時間膠沒有完(空格)全熔掉,回收量就會少很多。
5、出現(xiàn)掛孔的原因?
用戶在電泳液外面點樣,樣品因為沒有電泳液保護,會很快擴散到膠里,有可能形成掛孔。
6、圖形不好怎么辦?
預制膠因為在低溫時間長,電泳時最好比客戶經(jīng)常使用的電壓低一些,調低20-40伏特左右,會得到比較好的圖形。
7、電泳是一個系統(tǒng),任何原料都可能引起變化,任何改變也需要調整。根據(jù)實際需求,選擇方案。
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