T4 UvsX重組酶在RPA反應中發(fā)揮關(guān)鍵作用

T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase是一種來源于T4噬菌體的重組酶，屬于RecA/Rad51叢的酶，它在RPA反應中發(fā)揮關(guān)鍵作用。T4 UvsX重組酶具有典型的ABC三結(jié)構(gòu)域，分別負責ATP結(jié)合，相互作用與DNA結(jié)合。它通過識別單鏈DNA上連續(xù)的6-8個核苷酸堿基，與DNA形成球狀多聚體結(jié)構(gòu)。

T4 UvsX Recombinase由E.coli表達的重組蛋白，是將蛋白基因接入穩(wěn)定表達載體，經(jīng)克隆篩選，質(zhì)量驗證，挑選的穩(wěn)定表達株，由化學成分確定的培養(yǎng)基（不含有任何動物源成分）發(fā)酵制備，工藝穩(wěn)定，保證了產(chǎn)品質(zhì)量及批次間的一致性。

規(guī)格參數(shù)：

貨號：EH03501

規(guī)格：100ug/1mg/5mg/20mg

為工業(yè)客戶提供g級。

質(zhì)量控制:

純      度: 經(jīng)高效液相色譜（SEC-HPLC）和SDS-PAGE檢測，純度大于95%.

使用說明：

長期儲存于-80℃，首(空)次使用后保存于-20℃,避免反復凍融。

工作機理:

T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase在RPA反應中的主要作用是:

(1)穩(wěn)定單鏈DNA

在常溫下，雙鏈DNA初變性為單鏈DNA后，T4 UvsX Recombinase立即識別并結(jié)合單鏈DNA，形成穩(wěn)定的蛋白-DNA復合體，防止單鏈DNA再次回環(huán)成雙鏈。

(2)引物退火

在T4 UvsX Recombinase的保護下，引物與單鏈DNA進行退火，與之形成短的雙鏈DNA片段。

(3)替換與釋放

當聚合酶識別引物-模板雙鏈體并開始進行延伸時，T4 UvsX Recombinase被替換并釋放，使單鏈DNA完(空)全暴露，供聚合酶延伸。

(4)再循環(huán)

延伸產(chǎn)生的新合成DNA同樣暴露為單鏈，T4 UvsX Recombinase再次識別并結(jié)合，實現(xiàn)再循環(huán)，直至擴增完成。

T4 UvsX重組酶優(yōu)點:

• 可在常溫下高效穩(wěn)定單鏈DNA，這是RPA實現(xiàn)等溫擴增的關(guān)鍵。

• 與DNA的結(jié)合和釋放是反復可逆的，這使其在RPA反應中的再循環(huán)利用成為可能。

• 易于保存和純化，更利于RPA技術(shù)的商業(yè)化開發(fā)。

• 目前已有成熟的生產(chǎn)工藝，降低了RPA成本，有利于其廣泛應用。

T4 UvsX重組酶在RPA技術(shù)中主要應用如下:

1. RPA反應中的關(guān)鍵酶

T4 UvsX Recombinase在RPA反應中用于穩(wěn)定和保護單鏈DNA，并在引物退火和聚合酶延伸過程中實現(xiàn)替換和再循環(huán)，這是RPA技術(shù)實現(xiàn)等溫擴增的關(guān)鍵。

2. 商業(yè)RPA試劑盒

許多商業(yè)RPA試劑盒中的重組酶成分主要由T4 UvsX Recombinase提供，如TwistDx的Recombinase Polymerase Amplification kit等。

3. POCT檢測試劑

RPA技術(shù)因其快速、簡便的優(yōu)點，非常適合POCT。而T4 UvsX Recombinase的應用是實現(xiàn)RPA的POCT檢測試劑的關(guān)鍵。一些基于此的產(chǎn)品已用于臨床快速診斷，如Ebola病毒、Meningitis等的檢測。

4. 病原體核酸檢測

設(shè)計與特定病原體高度保守的基因片段同源的引物，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可實現(xiàn)病原體DNA/RNA的快速、高靈敏度檢測,用于臨床病原體感染的診斷。

5. 基因檢測與分型

針對特定的基因突變或多態(tài)性位點設(shè)計引物，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可用于相關(guān)基因型的檢測與分型，應用于遺傳病基因診斷等。

6. 體外核酸檢測

將與靶核酸同源的引物與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可實現(xiàn)體外各種DNA、RNA的高通量檢測，如miRNA、circRNA的檢測等，用于生物學基礎(chǔ)研究與臨床診斷。

7. 轉(zhuǎn)基因生物檢測

設(shè)計特異性引物擴增轉(zhuǎn)基因片段，與T4 UvsX Recombinase及RPA技術(shù)聯(lián)用，可實現(xiàn)轉(zhuǎn)基因生物的快速檢測，用于食品安全等領(lǐng)域。

相關(guān)產(chǎn)品：

EH03501 T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase

EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein

EH03401 T4噬菌體基因32編碼蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein

EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment

H10124 dNTP Mix 10 mM 用于PCR擴增 /dATP、dCTP、dGTP和dTTP的預混溶液

H30159 聚乙二醇 8000 PEG 8000 25322-68-3

HA11521 1,4-二硫代蘇糖醇（DTT） DL-Dithiothreitol 3483-12-3 ≥99.0% 100g/1kg

HA11724 磷酸肌酸二鈉鹽 Creatine phosphate disodium salt 922-32-7

EH04501 重組肌酸激酶(CK) Creatine Kinase

HA11725 5'-三磷酸腺苷二鈉(ATP-2Na)/Adenosine 5'-triphosphate disodium salt hydrate 34369-07-8