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OPM奧浦邁培養(yǎng)基SagiCHO Medium上?，F(xiàn)貨

SagiCHOTM 是化學(xué)成分確定（Chemically-defined）基礎(chǔ)培養(yǎng)基，不含水解物、蛋白、生長(zhǎng)因子及任何動(dòng)物 來(lái)源的成分，適合于不同亞型中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞（CHO-K1、CHO DG44 和 CHO-S 細(xì)胞）的高密度懸浮培養(yǎng)， 可實(shí)現(xiàn)重組蛋白和抗體的高水平表達(dá)。SagiCHOTM 基礎(chǔ)培養(yǎng)基與高性能補(bǔ)料及超濃縮補(bǔ)料聯(lián)用，可支持細(xì)胞高 密度生長(zhǎng)及活率維持，實(shí)現(xiàn)更高水平的蛋白/抗體表達(dá)和質(zhì)量。

應(yīng)用范圍

SagiCHOTM 可應(yīng)用于 CHO 細(xì)胞的復(fù)蘇、傳代以及高密度流加培養(yǎng)。該基礎(chǔ)培養(yǎng)基適用于科研和基于細(xì)胞培養(yǎng) 的大規(guī)模生物制品的生產(chǎn)，但不可直接用于人體或作為藥物使用。

儲(chǔ)存：2~8℃冷藏，干燥避光保存

運(yùn)輸：常溫（液體）、冷藏（干粉）

液體培養(yǎng)基配制方法

1. 取潔凈的配制容器，建議一次性配制體積不低于 1L；

2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水，水溫控制在 25~35°C；

3. 稱(chēng)量 21.73 g/L 干粉培養(yǎng)基，緩慢加入水中攪拌 10 分鐘；

4. 稱(chēng)量 2.22 g/L 碳酸(空格)氫鈉，加入水中攪拌；

5. 緩慢加入 5N NaOH 調(diào)節(jié) pH 到 8.3-8.5，攪拌 30 分鐘，此時(shí)應(yīng)完(空格)全溶解；

6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調(diào)回至 7.0；

7. 定容到最終配液體積，繼續(xù)攪拌 5 分鐘，測(cè) pH，用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調(diào)回至 7.0；

8. 取樣測(cè)滲透壓，加入 NaCl 調(diào)節(jié)滲透壓至 290±15 mOsm/kg（滲透壓計(jì)算公式：NaCl 添加量（g）=配液體 積（L）*（290-檢測(cè)值）/31.5）；

9. 繼續(xù)攪拌 10 分鐘，無(wú)菌過(guò)濾到合適容器，2~8℃避光保存。

培養(yǎng)條件

溫度 37℃，濕度 80%，5~8% CO2

搖床設(shè)置：轉(zhuǎn)速 110~150rpm（振幅 50 mm）

細(xì)胞復(fù)蘇

1. 在 37℃水浴中快速（＜2min）融化冷凍的細(xì)胞；

2. 將冷凍管中的細(xì)胞液全部轉(zhuǎn)移到 125ml 含有 30ml 預(yù)溫過(guò)的 SagiCHOTM 培養(yǎng)基的搖瓶中；

3. 放入 37℃，5~8% CO2，轉(zhuǎn)速 110~130rpm（振幅 50 mm），濕度 80%的搖床中培養(yǎng)；

4. 細(xì)胞至少傳代 2 次，待其完(空格)全復(fù)蘇，細(xì)胞倍增時(shí)間（Population Doubling Time，PDT）穩(wěn)定后，可按計(jì) 劃進(jìn)行后續(xù)操作。

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細(xì)胞傳代

1. 將 SagiCHOTM培養(yǎng)基放入 37℃條件下預(yù)熱 20-30 min；

2. 取細(xì)胞密度≥1×106 cells/ml、活率≥90%、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期的細(xì)胞進(jìn)行傳代；

3. 按接種密度為 0.5×106 ~ 1.0×106 cells/L 的最終傳代體積，計(jì)算所需種子液量；

4. 無(wú)菌轉(zhuǎn)移所需量的種子液，添加至含所需體積的已預(yù)熱的 SagiCHOTM培養(yǎng)基的搖瓶中；

5. 將搖瓶放入溫度 37℃，濕度 80%，轉(zhuǎn)速 110~150rpm（振幅 50 mm），5%~8% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)搖床中進(jìn) 行培養(yǎng)；

6. 每 2~3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

細(xì)胞馴化

直接接種法

1. 對(duì)于可以直接接種的細(xì)胞，可以從無(wú)血清培養(yǎng)基中直接接種到 SagiCHOTM 培養(yǎng)基中，接種密度參考傳代 步驟，并需要依據(jù)具體情況而定。

2. 繼續(xù)傳代細(xì)胞，直到細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)。

3. 傳代幾次后，細(xì)胞密度在接種的 3~4 天內(nèi)達(dá)到 2×106 cells/ml 及以上、細(xì)胞活率＞90%，且倍增時(shí)間穩(wěn)定， 此時(shí)可以認(rèn)為細(xì)胞已被馴化成功。

梯度馴化法

1. 對(duì)于傳統(tǒng)的生長(zhǎng)在 5~10%血清或無(wú)血清的細(xì)胞，采用梯度馴化法，接種密度 3×105 ~4×105 cells/ml。

2. 監(jiān)測(cè)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，直到細(xì)胞密度達(dá)到≥2×106 cells/ml。

3. 用 SagiCHOTM培養(yǎng)基：原始培養(yǎng)基=25:75 的比例稀釋細(xì)胞。直到這個(gè)比例的培養(yǎng)基細(xì)胞生長(zhǎng)良好，再進(jìn) 一步稀釋培養(yǎng)。在接下來(lái)的每次操作中，提高 SagiCHOTM 培養(yǎng)基的比例，如下表所示。

4. 在完(空格)全使用 SagiCHOTM 培養(yǎng)基接種 3~4 天之后，活細(xì)胞計(jì)數(shù)應(yīng)該至少達(dá)到 2×106 cells/ml，細(xì)胞活性≥ 90%。此時(shí)，細(xì)胞已經(jīng)馴化到 SagiCHOTM培養(yǎng)基中。

細(xì)胞凍存

1. 準(zhǔn)備處于指數(shù)生長(zhǎng)的中期，細(xì)胞活率＞90%，狀態(tài)較好的細(xì)胞。

2. 測(cè)定活細(xì)胞密度，計(jì)算所需的凍存培養(yǎng)基體積，最終細(xì)胞密度＞1×107 cells/ml。

3. 準(zhǔn)備所需的凍存培養(yǎng)基 90% SagiCHOTM 培養(yǎng)基+10%DMSO，4℃冷藏保存。

4. 400×g 離心 5 分鐘，用凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

5. 根據(jù)項(xiàng)目具體需要，將懸浮液進(jìn)行等分保存于適宜規(guī)格的冷凍管中。

6. 按照標(biāo)準(zhǔn)程序，對(duì)冷凍管進(jìn)行自動(dòng)或手工操作降溫（每分鐘降 1℃）。

7. 將細(xì)胞轉(zhuǎn)移到液氮罐中保存。