高活性凝血酶Thrombin from bovine 返回列表頁

HM0085

高活性凝血酶Thrombin from bovine

9002-04-4

Enzyme

37KD

1ku

1000MU

白色或類白色無定形粉末或固體

≥2000U/mgIVD,生化研究

Factor IIa；凝血活素；血液凝血因子3；原激酶；凝血因子

water

-20℃，保質(zhì)期3年

上?；菡\生物科技有限公司提供定性好高活性凝血酶Thrombin from bovine,酶活性≥2000U/mg.上?；菡\生物的凝血酶(Thrombin)來源于牛血漿,分子量37KD,是由兩條肽鏈（31KD和6KD）通過二硫鍵組成的。凝血酶是凝血酶原（凝血因子Ⅱ）激活后形成的蛋白質(zhì)水解酶,Thrombin is an enzyme involved in blood coagulation and it catalyzes the reaction to convert fibrinogen to fibrin. It is present in blood as inactive prothrombin and activated to thrombin by the action of thromboplastin (thrombokinase) released from platelets in bleeding and calcium ion. Thrombin is known as blood coagulation factor IIa and prothrombin as factor II.
凝血酶Thrombin(from bovine plasma)
CAS:9002-04-4
來源：牛血漿
活力：≥2000U/mg
性狀：白色或類白色無定形粉末或固體。溶于水，不溶于有機溶劑。由動物血漿分離制得的凝血酶原，再用凝血致活酶和氯化鈣激活而成。是一種蛋白水解酶，血漿中的可溶性纖維蛋白原在凝血酶的激活下，轉(zhuǎn)變成不溶性纖維蛋白網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，使血液凝固。纖維蛋白原有六條肽鏈組成，凝血酶的組成是從四條肽鏈的N端切斷一定特定的肽鍵（—Arg—Gly），放出兩個A肽（19肽）和兩個B肽（21肽），另二條N端為酷氨酸的肽鏈沒有變化。A肽和B肽切除后，減少了蛋白質(zhì)分子的負電荷，促進了纖維蛋白分子的直線聚合和側(cè)向聚合，從而形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的纖維蛋白

凝血酶使用說明：

(一)融合蛋白切割

由于凝血酶具有切割序列專一性強，水解效率高的特點，它被廣泛地應用于基因工程產(chǎn)品的開發(fā)，其應用之一是作為工具蛋白酶用于重組融合蛋白質(zhì)的特異性斷裂，尤其適用于生物工程制藥業(yè)及基因工程、生物化學、分子生物學等研究。

凝血酶是一種廣泛用于切割標簽的蛋白酶，能夠有效切質(zhì)量比僅為1:2000的蛋白。切割可在20℃到37℃之間切割0.3到16小時。凝血酶*的切割位點是X4-X3-P-R[K]-X1'-X2',這里X4 和 X3 是疏水氨基酸而X1'和 X2'是非酸性氨基酸，一些經(jīng)常使用的識別位點是L-V-P-R-G-S,L-V-P-R-G-F,和MY-P-R-G-N。在X4-X3-P-R-G-X2'之間切割比在X4-X3-P-K-L-X2'更有效。其他識別位點是 X2-R[K]-X1', 這里X2 或者 X1'是甘氨酸，例如A-R-G和G-K-A，這里切割發(fā)生在第二個殘基后。在凝血酶切割位點和N末端標簽之間插入五個甘氨酸殘基可改善切，通過這一"甘氨酸連接肽"只需較少酶量就可達到*切割,而且也可以避免可能發(fā)生的錯誤切割。有效的消化緩沖液是20mM Tris-HCl緩沖液,含150mM氯化鈉,pH8.0。凝血酶可從切割產(chǎn)物中用p-氨基瓊脂糖親和純化,或者苯甲脒瓊脂糖移去。

(二)血小板聚集試驗

凝血酶與血小板表面的凝血酶受體結(jié)合，活化血小板，使血小板粘附和聚集
血小板聚集實驗參照文獻：
兔血用塑料管收集和用ACD(86 mmol／L檸檬酸鈉，111 mmol／L葡萄糖，53 mmol／L檸檬酸)0.15體積比抗凝，200 g離心10 min，離心2次，取上清，800g離心15 min。沉淀中加Tyrode—Hepes緩沖液(140 mmol／L NaCl，5 mmol／L KCl，1 mmol／L MgCl2，10 mmol／L Hepes，10mmol／L葡萄糖，pH 7.4)調(diào)節(jié)至血小板數(shù)為(3～4)×1011／L。血小板聚集用血液凝集儀來測定。血小板懸液(0.2ml )與藥物溫育1 min，然后用凝血酶(500 u／L)作用5 min，記錄聚集情況。

凝血酶產(chǎn)品特點：
1、純度高：SDS-PAGE檢測圖譜無雜蛋白條帶；
2、比活高：比活力大于2000單位/mgpr；
3、不含有其他蛋白酶活性；
4、滅活病毒:凝血酶生產(chǎn)過程中采用S/D法和干熱法兩步滅活病毒；
5、產(chǎn)品穩(wěn)定性好：凍干產(chǎn)品在室溫條件下考察12個月，酶活力未見顯著變化，冷藏條件下保存36個月，凝血酶酶活力未見顯著變化；
6、性價比及其突出，尤其對于工業(yè)客戶