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核酸外切酶III惠誠(chéng)生物Exonuclease III

核酸外切酶 III Exonuclease III來(lái)源于大腸桿菌，是一個(gè)由四條相同的多肽鏈組成的環(huán)狀四聚體，每個(gè)單鏈約包含310個(gè)氨基酸，屬于III型外切酶家族。Exonuclease III是一種重要的單鏈DNA外切酶，可高效和序列特異性的切除DNA單鏈的5'端核苷酸。Exonuclease III可用于DNA的定性和定量分析、DNA-蛋白質(zhì)相互作用的研究以及染色體結(jié)構(gòu)的分析等。在RPA技術(shù)中使用Exonuclease III，可以有效減少非特異性擴(kuò)增、提高檢出靈敏度、加快反應(yīng)速度、改善產(chǎn)物檢測(cè)和減少引物二聚化等。Exonuclease III的加入可以產(chǎn)生協(xié)同作用，優(yōu)化RPA反應(yīng)，實(shí)現(xiàn)更快速、更靈敏和更專一的等溫?cái)U(kuò)增，提高RPA技術(shù)的性能，拓展其應(yīng)用范圍。  

核酸外切酶III惠誠(chéng)生物Exonuclease III

規(guī)格參數(shù)：

貨號(hào)：EH04701 

規(guī)格：5000U/25000U     

為工業(yè)客戶提供n*25000U。

質(zhì)量控制:

純      度: 經(jīng)高效液相色譜（SEC-HPLC）和SDS-PAGE檢測(cè)，純度大于95%.

使用說明：

長(zhǎng)期儲(chǔ)存于-80℃，使用后保存于-20℃,避免反復(fù)凍融。

核酸外切酶 III 產(chǎn)品特點(diǎn)：

1. Exonuclease III 包含兩個(gè)結(jié)合部位：

內(nèi)切位點(diǎn)：與DNA雜交，定位切割位點(diǎn);

外切位點(diǎn)：負(fù)責(zé)將磷酸基團(tuán)從DNA磷酸主鏈上切除。

2. 單鏈特異性

Exonuclease III只可作用在DNA的單鏈區(qū)域，雙鏈DNA區(qū)域不具有活性，這使其成為研究雙鏈DNA解旋及DNA-蛋白質(zhì)相互作用的重要工具。

3. 依賴性

Exonuclease III的活性依賴Mg2+或Mn2+，并受到溶液的pH值影響，最適作用pH為7.6。高濃度的NaCl可抑制其活性。

4. 切割效率

在最適條件下，Exonuclease III的切割速度為每秒500-1000個(gè)磷酸基團(tuán)，切割效率較高。

核酸外切酶 III 催化機(jī)制:

1. 與DNA的5'端結(jié)合，內(nèi)切位點(diǎn)識(shí)別切割位點(diǎn);

2. 外切位點(diǎn)將第一個(gè)5'端的磷酸基團(tuán)從DNA磷酸主鏈上切除，釋放5'-磷酸單核苷酸;

3. Exonuclease III沿著DNA鏈移向3'端，重復(fù)步驟b，依序切除核苷酸;

4. 當(dāng)遇到雙鏈DNA區(qū)域或某些DNA修飾時(shí)，酶失去活性，終止切割。

核酸外切酶 III Exonuclease III主要應(yīng)用如下:

1. DNA序列分析

使用Exonuclease III對(duì)單鏈DNA進(jìn)行定向切割，分離切割產(chǎn)物，并通過測(cè)序分析其序列，這是一種簡(jiǎn)單有效的DNA序列分析方法。

2. 基因型分析

設(shè)計(jì)特異引物用于PCR擴(kuò)增，然后使用Exonuclease III切割未連接的單鏈DNA，保留雙鏈DNA。測(cè)序分析雙鏈DNA可實(shí)現(xiàn)基因型的準(zhǔn)確分析。 

3. DNA修飾檢測(cè)

某些DNA修飾如甲基化可抑制Exonuclease III的活性，利用這一特點(diǎn)，可通過Exonuclease III切割檢測(cè)DNA的修飾狀態(tài)。

4. DNA多態(tài)性分析

Exonuclease III可用于切割單鏈DNA，分離并測(cè)序不同等位基因，實(shí)現(xiàn)DNA Sequence Variation的精確分析。

5. DNA損傷檢測(cè)

DNA損傷會(huì)阻礙Exonuclease III切割，利用這一特性，可通過比較Exonuclease III切割效率判斷DNA是否存在損傷。

6. DNA-蛋白質(zhì)相互作用

Exonuclease III切割受DNA結(jié)合蛋白的影響，可用于標(biāo)定DNA與蛋白質(zhì)的結(jié)合位點(diǎn)及研究結(jié)合機(jī)理。

7. 核苷酸切除測(cè)定

使用放射性標(biāo)記的DNA進(jìn)行Exonuclease III切割，通過測(cè)量釋放的放射性核苷酸定量切除效率，來(lái)研究影響Exonuclease III活性的因素。  

8. DNA解旋測(cè)定

將Exonuclease III用于雙鏈DNA，通過比對(duì)雙鏈區(qū)域和單鏈區(qū)域的切割情況來(lái)判斷DNA的解旋狀態(tài)，研究DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)。

9. 核型分析

Exonuclease III可用于切割整個(gè)染色體DNA，產(chǎn)生特定長(zhǎng)度的DNA片段，通過電泳分離并制作核型，實(shí)現(xiàn)遺傳學(xué)分析。 

核酸外切酶 III Exonuclease III在RPA技術(shù)中應(yīng)用：

1. 降低非特異性產(chǎn)物

RPA反應(yīng)在一定條件下可能產(chǎn)生非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，Exonuclease III可以選擇性地降解這些非特異性產(chǎn)物的3'單鏈末端，減少其濃度,提高RPA產(chǎn)物的純度和專一性。

2. 提高檢出靈敏度

Exonuclease III可以降解未結(jié)合引物的單鏈DNA，但不會(huì)降解已與引物結(jié)合的特異性產(chǎn)物。這可以有效減少反應(yīng)底物，提高特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的相對(duì)濃度，提高RPA的檢出靈敏度。

3. 加快反應(yīng)速度

Exonuclease III通過降解未結(jié)合引物的單鏈DNA，可以減少反應(yīng)中的底物競(jìng)爭(zhēng)，使更多的引物和DNA聚合酶結(jié)合到特異性的擴(kuò)增區(qū)域，加快RPA的反應(yīng)速度。

4. 改善產(chǎn)物檢測(cè)

Exonuclease III降解RPA反應(yīng)中的游離DNA后可以產(chǎn)生更純凈的特異性擴(kuò)增產(chǎn)物，易于后續(xù)的電泳、測(cè)序分析等檢測(cè)，有利于RPA產(chǎn)物的分析和鑒定。

5. 減少引物二聚化

部分引物在RPA反應(yīng)條件下可能發(fā)生二聚化，影響其與模板DNA的結(jié)合。Exonuclease III可以降解這些引物二聚體，使更多的引物與模板DNA結(jié)合，提高RPA的擴(kuò)增效率。

相關(guān)RPA原料：

EH04401 DNA重組酶 Recombinase A

EH03201 Bst DNA聚合酶 Bst DNA polymerase

EH04801 核酸外切酶 IV Exonuclease IV

EH04701 核酸外切酶 III Exonuclease III

EH02501 M-MuLV反轉(zhuǎn)錄酶 M-MuLV Reverse Transcriptase

EH03301 Bsu DNA聚合酶大片段 Bsu DNA polymerase, Large Fragment

EH04501 重組肌酸激酶(CK) Creatine Kinase

EH03501 T4 UvsX重組酶 T4 UvsX Recombinase

EH03401 T4噬菌體基因32編碼蛋白(gp 32) T4 gene 32 Protein

EH03601 T4 UvsY蛋白 T4 UvsY Protein

HM0058 重組鼠源RNase抑制劑(40 U/µL) RNase Inhibitor