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多彩無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒惠誠生物供應(yīng)

貨號：MF032

品名：多彩無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒 M5 Hiper Multi-color Endofree Pureplasmid Maxi Kit

規(guī)格：10T

M5 Hiper Multi-color Endofree Pureplasmid Maxi Kit

多彩無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提使用說明書

產(chǎn)品簡介

多彩無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒適用于無內(nèi)毒素高純度質(zhì)粒DNA的大量制備與純化,柱上去除內(nèi)毒素,操作簡單.菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,質(zhì)粒可從菌體中釋放出來,并特異高效地被離心柱硅膠膜吸附.通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質(zhì),最后得到高純度的無內(nèi)毒素質(zhì)粒 DNA,所得質(zhì)?？芍苯佑糜诿盖?轉(zhuǎn)化,PCR,測序,細胞轉(zhuǎn)染等分子生物學(xué)實驗.高拷貝質(zhì)粒,100ml 菌液通常能提到500-1500ug 質(zhì)粒,低拷貝質(zhì)粒,200ml 菌液通常能提到50-300ug質(zhì)粒（提取效率優(yōu)于市面上其他品牌同等產(chǎn)品）

產(chǎn)品特色

1. 快捷、高效：顏色變化，適合判斷；操作簡便，得率高，節(jié)約時間；

2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈；

3. 內(nèi)毒素去除簡單：柱上去除內(nèi)毒素，方便快速，清除干凈。

注意事項

1. 細菌培養(yǎng)時間一般為 12 ~ 16 小時（用錐形瓶或者試管搖菌，留夠足夠的空間讓細菌接觸空氣，利于細菌生長），如接種量大則 應(yīng)減少培養(yǎng)時間，過度培養(yǎng)會降低質(zhì)粒質(zhì)量甚至導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 突變；

2. 每次使用時都要注意 Solution II 和 III 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用；

3. 加入 Solution II 裂解細菌，直至溶液成紫紅色粘稠透明狀，時間過長會導(dǎo)致質(zhì)粒 DNA 變性；

4. 質(zhì)粒的產(chǎn)量跟細菌量、質(zhì)?？截悢?shù)、質(zhì)粒大小和操作規(guī)范程度密切相關(guān)。

多彩無內(nèi)毒素質(zhì)粒大提試劑盒惠誠生物供應(yīng)

操作步驟

柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的平衡液 BL，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新 放回收集管中。（請使用當(dāng)天處理過的柱子）

1. 取 100 ~ 200 ml（如果是低拷貝質(zhì)粒可以收集更多菌液）過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min，棄上清。

2. 加入 10 ml Solution I，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻，呈現(xiàn)出均勻混濁的棕紅色。 注意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未*懸浮的菌塊會影響裂解，導(dǎo)致提取的質(zhì)粒濃度及純度降低。

3. 加入 10 ml Solution II，溫和顛倒混勻使菌體*裂解，直到溶液變成清亮、粘稠的紫紅色。 注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過 5 min，以免質(zhì)粒受到破壞，如未*變得清亮，可能 是菌體太多，可增加 Solution II 的用量，在后續(xù)的操作中 Solution III 的用量也要相應(yīng)增加。

4. 加入 10 ml Solution III，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直到*變?yōu)辄S色，室溫靜置 2 min，然后 10,000 rpm 離心 10 min，將上清轉(zhuǎn)移至干凈離心管（自備）中，注意不要帶入沉淀。 注意：Solution III 加入后應(yīng)立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀，如果上清中還有紫色漂浮物，說明復(fù)性不充分，繼續(xù)混勻至溶液顏色完(空格)全變?yōu)槌吻宓狞S色。 （如果實驗室離心機采用吊籃式，不是固定轉(zhuǎn)子，轉(zhuǎn)速達不到 10000rpm，可以采用吊籃離心的最大轉(zhuǎn)速 4250g，離心 10 分鐘）

5. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙醇，上下顛倒混勻。 注意：加入異丙醇過多容易導(dǎo)致 RNA 污染。

6. 將步驟 5 中液體與異丙醇的混合溶液轉(zhuǎn)移到平衡好的吸附柱中（使用當(dāng)天用平衡液處理的吸附柱，放入 50 ml 收集管中），靜置 2 min，讓質(zhì)粒 DNA 與吸附柱中的硅膠膜充分結(jié)合。10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中的濾液。 注意：吸附柱的最大容積為 15 ml，所以上步中所得溶液分多次過柱。如果離心機轉(zhuǎn)子傾角較大時，建議加入吸附柱的溶液體積不超 過 10 ml，以防發(fā)生漏液現(xiàn)象。

7. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室溫靜置 10 min，10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。

8. 加入 10 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。 注意：Buffer WB2 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應(yīng)立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)。

9. 加入 5 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。

10. 室溫 10,000 rpm 離心 5 min，甩干殘留液體。

11. 將離心吸附柱置于一個新的 50 ml 塑料離心管中，打開管蓋，放置 5 min，使乙醇*揮發(fā)干凈。

12. 加入 1 ~ 2 ml 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，10,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即質(zhì)粒 DNA。

注意：為增加洗脫效率，可將得到的質(zhì)粒溶液重新加入到吸附柱中重復(fù)步驟 11 一次，如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調(diào)整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間.

【低拷貝或大質(zhì)粒（>10 kb）提取】

如果所提質(zhì)粒為低拷貝質(zhì)粒，或大于 10 kb 的大質(zhì)粒，或提取農(nóng)桿菌質(zhì)粒，或提取革蘭氏陽性菌質(zhì)粒，應(yīng)加大菌體使用量，使用 300 ~ 500 ml 過夜培養(yǎng)物，最后洗脫液 Buffer EB 60℃水浴預(yù)熱，吸附和洗脫時可以適當(dāng)延長時間，以增加提取效率。其它步驟相同。

本產(chǎn)品僅供科研使用。在確認產(chǎn)品質(zhì)量出現(xiàn)問題時，本公司承諾為客戶免費更換等量的質(zhì)量合格產(chǎn)品。

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