聚合美無內毒素質粒大提試劑盒惠誠生物供應 返回列表頁

聚合美無內毒素質粒大提試劑盒惠誠生物供應

貨號：MF985

品名：聚合美無內毒素質粒大提試劑盒 M5 Easy-High EndoFree Plasmid Maxi Kit

規(guī)格：10T

Easy-High EndoFree Plasmid Maxi Kit

無內毒素質粒大提試劑盒使用說明書

產(chǎn)品簡介

聚合美質粒大提試劑盒適用于無內毒素高純度質粒 DNA 的大量制備與純化,柱上去除內毒素,操作簡單.菌體經(jīng)改良的堿裂解處理,質?？蓮木w中釋放出來,并特異高效地被離心柱硅膠膜吸附.通過去蛋白液和漂洗液的清洗可去除蛋白及其他雜質,最后得到高純度的無內毒素質粒 DNA,所得質?？芍苯佑糜诿盖?轉化,PCR,測序,細胞轉染等分子生物學實驗.高拷貝質粒,100ml 菌液通常能提到500-1500ug 質粒,低拷貝質粒,200ml 菌液通常能提到 200-600ug 質粒（提取效率優(yōu)于市面上其他品牌同等產(chǎn)品）

產(chǎn)品特色

1. 快捷、高效：顏色變化，適合判斷；操作簡便，得率高，節(jié)約時間；

2. 純度高：沉淀致密，去雜干凈；

3. 內毒素去除簡單：柱上去除內毒素，方便快速，清除干凈。

聚合美無內毒素質粒大提試劑盒惠誠生物供應

儲存條件

15-25℃干燥條件下，可保存 12 個月；更長時間的保存可置于 2-8℃。單獨包裝的 RNase A 在室溫可穩(wěn)定保存 12 個月。加入 RNase A 后的 Solution I 應置于 2-8℃保存，可穩(wěn)定保存 6 個月。若溶液 II 產(chǎn)生沉淀，應在使用前置于 37℃下溶解沉淀后再使用。

注意事項

1. 細菌培養(yǎng)時間一般為 12-16 小時（用錐形瓶或者試管搖菌，留夠足夠的空間讓細菌接觸空氣，利于細菌生長），如接種量大則 應減少培養(yǎng)時間，過度培養(yǎng)會降低質粒質量甚至導致質粒 DNA 突變；

2. 每次使用時都要注意 Solution II 和 N3 是否形成沉淀，如有沉淀 37℃溶解后再用；

3. 加入 Solution II 裂解細菌，直至溶液成紫紅色粘稠透明狀，時間過長會導致質粒 DNA 打斷變性；

4. 質粒的產(chǎn)量跟細菌量、質粒拷貝數(shù)、質粒大小和操作規(guī)范程度密切相關。

操作步驟

柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 2.5 ml 的平衡液 BL，10,000 rpm 離心 2 min，棄收集管中濾液，將吸附柱重新 放回收集管中。（請使用當天處理過的柱子）

1. 取 100-200 ml（低拷貝質粒可收集更多菌液，最高 300ml 菌液）過夜培養(yǎng)的菌液，室溫 10,000 rpm 離心 2 min，棄上清。

2. 加入 10 ml Solution I，旋渦震蕩或用移液器充分吹打使菌體重懸均勻，呈現(xiàn)出均勻混濁的棕紅色。 注意：菌體沉淀一定要懸浮均勻，如有未*懸浮的菌塊會影響裂解，導致提取的質粒濃度及純度降低。

3. 加入 10 ml Solution II，溫和顛倒混勻使菌體*裂解，直到溶液變成清亮、粘稠的紫紅色。 注意：不可劇烈震蕩，以免造成基因組 DNA 片段的污染，所用時間不要超過 5 min，以免質粒受到破壞，如未*變得清亮，可能 是菌體太多，可增加 Solution II 的用量，在后續(xù)的操作中 Solution N3 的用量也要相應增加。

4. 加入 10 ml Solution N3，立即溫和顛倒混勻，可見紅黃相間的絮狀物產(chǎn)生，繼續(xù)混勻直到*變?yōu)辄S色。然后 10,000 rpm 離心 10 min，將上清轉移至干凈離心管（自備）中，注意不要帶入沉淀。 注意：1）Solution N3 加入后應立即混合，避免產(chǎn)生局部沉淀，如果上清中還有紫色漂浮物，說明復性不充分，繼續(xù)混勻至溶液顏 色*變?yōu)槌吻宓狞S色。 2）離心后在最上層可能會形成一層致密的漂浮膜，注意不要倒入吸附柱。 （如果實驗室離心機采用吊籃式，不是固定轉子，轉速達不到 10000rpm，可以采用吊籃離心的最大轉速 4250g，離心 10 分鐘）

5. 加入 0.3 倍濾液體積的異丙醇，上下顛倒混勻。 注意：加入異丙醇過多容易導致 RNA 污染。

6. 將步驟 5 中液體與異丙醇的混合溶液轉移到平衡好的吸附柱中（使用當天用平衡液處理的吸附柱，放入 50 ml 收集管中）， 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中的濾液。 注意：吸附柱的最大容積為 15 ml，所以上步中所得溶液分多次過柱。如果離心機轉子傾角較大時，建議加入吸附柱的溶液體積不 超過 10 ml，以防發(fā)生漏液現(xiàn)象。

7. 向吸附柱中加入 5 ml ToxinOut Buffer，室溫靜置 5 min，10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。

8. 加入 10 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。 注意：Buffer WB2 為濃縮液，按要求加入無水乙醇，用后應立即蓋緊瓶蓋，以防酒精揮發(fā)。

9. 加入 5 ml Buffer WB2，室溫 10,000 rpm 離心 1 min，棄收集管中濾液。

10. 室溫 10,000 rpm 離心 5 min，甩干殘留液體。

11. 將離心吸附柱置于一個新的 50 ml 塑料離心管中，打開管蓋，放置 5 min，使乙醇*揮發(fā)干凈。

12. 加入 1-2 ml 洗脫液 Buffer EB，室溫放置 2 min，10,000 rpm 離心 2 min，離心管底溶液即質粒 DNA。 注意：為增加洗脫效率，可將得到的質粒溶液重新加入到吸附柱中重復步驟 11 一次，如需使用去離子水洗脫，可用 NaOH 調整其 pH 值在 7.0 - 8.5 之間。

低拷貝或大質粒（>10 kb）提取】

低拷貝質粒，或>10 kb 的質粒，或提取農(nóng)桿菌質粒，或提取革蘭氏陽性菌質粒，應加大菌體使用量，使用 300-500 ml 過夜培養(yǎng)物， 最后洗脫液 Buffer EB 60℃水浴預熱，吸附和洗脫時可以適當延長時間，以增加提取效率。其它步驟相同。

本產(chǎn)品僅供科研使用。在確認產(chǎn)品質量出現(xiàn)問題時，本公司承諾為客戶免費更換等量的質量合格產(chǎn)品。

相關推薦：

聚合美無內毒素質粒大提試劑盒 M5 Easy-High EndoFree Plasmid Maxi Kit

多彩無內毒素質粒大提試劑盒 M5 Hiper Multi-color Endofree Pureplasmid Maxi Kit