1.保證所有實驗室材料都無菌
穿插污染是細胞培育的大敵。即使是輕微的污染,也或許毀了幾個星期的效果,因培育箱內(nèi)溫暖濕潤,真菌極易成長,因而有必要注意定時清潔。
此外,在將培育瓶、移液管及其他的相關(guān)物品放入超凈臺之前,運用酒精擦拭干凈,以防止污染。
2.選擇上佳的培育基開發(fā)策略
在細胞培育進程中,培育基是操控產(chǎn)品質(zhì)量、產(chǎn)量和本錢的重要要素。有必要針對每種培育物來定制培育基,以優(yōu)化實驗成果,在決定以哪種方法來開發(fā)您的培育基時,您需要考慮時間和本錢等要素。
3.在傳代之前不要讓細胞集合
集合度是指貼壁細胞占有培育瓶表面積的份額。集合意味著100%的表面都被貼壁細胞覆蓋,一定要防止這種狀況,由于它意味著細胞不能繼續(xù)成長。不過,燃眉之急是運用活潑成長的細胞。
4.運用對數(shù)成長期的細胞
細胞培育進程共有3個階段:停滯期、對數(shù)期和平臺期,分別代表了低細胞成長、高細胞成長和無細胞成長,有生機的細胞是健康的,快速分裂的,在對數(shù)期以70-80%的集合度存在。
5.在運用前正確解凍細胞
盡管解凍看起來是個簡略的步驟,但有必要操作得當,防止損傷細胞。長期暴露在高溫條件下會使細胞無法鋪板,因而,凍存管應(yīng)當在37°C水浴中放置2分鐘,然后用條件培育基稀釋,以防止DMSO造成直接損傷。
6.小心處理您的培育物
細胞培育的脆弱性怎樣強調(diào)也不為過。劇烈搖晃,或接連的溫度波動或許會對成長發(fā)生不利的影響。保證培育箱是水平的,溫度均一,且遠離電動儀器。
此外,盡量防止一次處理多個細胞系,由于它或許會影響細胞的基因型和表型。
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