免疫熒光（單標(biāo)），熒光免疫組織化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞（或組織）化學(xué)。

免疫熒光（單標(biāo)）

免疫熒光（單標(biāo)）

服務(wù)簡(jiǎn)介：
熒光免疫組織化學(xué)是現(xiàn)代生物學(xué)和醫(yī)學(xué)中廣泛應(yīng)用的技術(shù)之一，免疫熒光技術(shù)與形態(tài)學(xué)技術(shù)相結(jié)合發(fā)展成免疫熒光細(xì)胞（或組織）。

冰凍切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

1、 冰凍切片固定：冰凍切片從冰箱拿出來(lái)復(fù)溫，晾干水分，冷丙酮固定10min，待丙酮*干后于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。

2、 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH8.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中低火5min，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。（修復(fù)液和修復(fù)強(qiáng)度根據(jù)組織來(lái)確定）

3、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫(huà)圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

4、 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）

5、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

6、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

7、 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

8、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm；FITC綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm；CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm）

 

石蠟切片免疫熒光實(shí)驗(yàn)步驟

1、 石蠟切片脫蠟至水：依次將切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-無(wú)水乙醇Ⅰ5min-無(wú)水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸餾水洗。

2、 抗原修復(fù)：組織切片置于盛滿EDTA抗原修復(fù)緩沖液（PH9.0）的修復(fù)盒中于微波爐內(nèi)進(jìn)行抗原修復(fù)。中火至沸后斷電間隔10min中低火至沸，此過(guò)程中應(yīng)防止緩沖液過(guò)度蒸發(fā)，切勿干片。自然冷卻后將玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。(修復(fù)液和修復(fù)條件根據(jù)組織來(lái)確定）

3、 BSA封閉:切片稍甩干后用組化筆在組織周圍畫(huà)圈（防止抗體流走），在圈內(nèi)滴加用3%BSA均勻覆蓋組織，室溫封閉30min。

4、 加一抗：輕輕甩掉封閉液，在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗，切片平放于濕盒內(nèi)4°C孵育過(guò)夜。（濕盒內(nèi)加少量水防止抗體蒸發(fā)）

5、 加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加與一抗相應(yīng)種屬的二抗覆蓋組織，避光室溫孵育50min。

6、 DAPI復(fù)染細(xì)胞核：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后在圈內(nèi)滴加DAPI染液，避光室溫孵育10min。

7、 封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脫色搖床上晃動(dòng)洗滌3次，每次5min。切片稍甩干后用抗熒光淬滅封片劑封片。

8、 鏡檢拍照：切片于尼康倒置熒光顯微鏡下觀察并采集圖像。（紫外激發(fā)波長(zhǎng)330-380nm，發(fā)射波長(zhǎng)420nm；FITC綠光激發(fā)波長(zhǎng)465-495nm，發(fā)射波長(zhǎng)515-555 nm；CY3紅光激發(fā)波長(zhǎng)510-560，發(fā)射波長(zhǎng)590nm）

 上海茁彩生物科技有限公司,可以承接諸多病理實(shí)驗(yàn)，樣本不僅含有基礎(chǔ)的動(dòng)物組織切片，還包括植物葉片、動(dòng)物細(xì)胞、骨片、腦片、皮膚等特殊樣本。染色種類多，染色方法全.石蠟染色，冰切染色均可操作,同時(shí)還可以承接整體實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目,包括樣本的造模,細(xì)胞的培養(yǎng),以及后續(xù)細(xì)胞的增殖、細(xì)胞粘附、細(xì)胞劃痕等實(shí)驗(yàn).