概述

本應(yīng)用文獻(xiàn)討論了有關(guān)內(nèi)毒素測(cè)試的樣品“批量測(cè)試（Batch Testing）”和樣品“保存時(shí)間（Hold Times）”，以及如何通過(guò)簡(jiǎn)單研究來(lái)較大化提高測(cè)試效率。質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室和研發(fā)實(shí)驗(yàn)室并不都是高通量實(shí)驗(yàn)室。很多實(shí)驗(yàn)室每天或每周只收到少量需要進(jìn)行鱟試劑（LAL，Limulus Amoebocyte Lysate）測(cè)試的樣品。為了使鱟試劑測(cè)試更省錢、更高效，實(shí)驗(yàn)室會(huì)先將樣品保存起來(lái)，攢夠一定數(shù)量的樣品時(shí)，才會(huì)用96孔板或Sievers*Eclipse微孔板進(jìn)行“批量測(cè)試”。批量測(cè)試能為用戶節(jié)省昂貴的鱟試劑。

確定樣品保存時(shí)間的重要性

進(jìn)行批量測(cè)試可以提高測(cè)試效率、降低總測(cè)試成本。然而，不少實(shí)驗(yàn)室的內(nèi)部“標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程（SOP，Standard Operating Procedure）”列明了測(cè)試的時(shí)間要求，例如必須在收到樣品或采集樣品后的24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行測(cè)試。這種時(shí)間限制使小型實(shí)驗(yàn)室無(wú)法保存批量樣品，而實(shí)際需要進(jìn)行的測(cè)試也并非如此急迫。監(jiān)管部門并不強(qiáng)制要求用戶在一定時(shí)間內(nèi)進(jìn)行測(cè)試，而“良好生產(chǎn)規(guī)范（GMP，Good Manufacturing Practice）”普遍要求用戶在樣品不損失內(nèi)毒素的前提下確定正確的測(cè)試時(shí)間要求，也就是“樣品保存時(shí)間”。研究并確定正確的樣品保存時(shí)間，能夠?yàn)槠胶鉁y(cè)試的質(zhì)量、成本、效率提供關(guān)鍵依據(jù)，也有助于用戶了解何時(shí)應(yīng)將樣品送達(dá)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析，何時(shí)可以獲得測(cè)試結(jié)果。

研究?jī)?nèi)毒素測(cè)試的樣品保存時(shí)間

為了節(jié)約昂貴的鱟試劑、消耗品成本，提高微孔板的使用率，用戶應(yīng)進(jìn)行簡(jiǎn)單的樣品保存時(shí)間研究，以確定在批量測(cè)試的樣品保存時(shí)間超過(guò)24小時(shí)的情況下樣品不會(huì)損失內(nèi)毒素。樣品保存時(shí)間研究旨在幫助質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室制定正確的“標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程”，明確規(guī)定樣品在測(cè)試之前可以存放的時(shí)間1。樣品保存時(shí)間研究的重要內(nèi)容之一是存放樣品的容器。用于內(nèi)毒素測(cè)試的樣品應(yīng)采集并存放在不干擾鱟試劑測(cè)試和不吸收內(nèi)毒素的容器中。聚丙烯容器會(huì)吸收內(nèi)毒素，而聚苯乙烯或硼硅酸鹽玻璃容器是最佳的樣品容器。

至少對(duì)4個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行樣品保存時(shí)間研究，才能確保研究結(jié)果有效且準(zhǔn)確2。比如，研究的時(shí)間點(diǎn)可以選在第0天、第1天、第3天、第7天?？梢詫?duì)水樣品、制程樣品、原料樣品、甚至成品藥樣品進(jìn)行保存時(shí)間研究，確定測(cè)試前的有效保存時(shí)間。在進(jìn)行保存時(shí)間研究時(shí)，對(duì)每一種樣品加入已知濃度的內(nèi)毒素。建議用戶在標(biāo)準(zhǔn)曲線中點(diǎn)處加入盡量低的濃度的內(nèi)毒素。但加入的濃度越高，越能在2倍該濃度內(nèi)回收樣品。例如美國(guó)注射劑協(xié)會(huì)（PDA）“TR 82技術(shù)報(bào)告”中規(guī)定加入的濃度為5 EU/mL（EU/mL：每毫升內(nèi)毒素活性單位）2。在建議的所有時(shí)間點(diǎn)測(cè)試樣品，測(cè)量并確認(rèn)樣品未損失內(nèi)毒素。

如果不進(jìn)行研究就保存樣品，測(cè)試就可能出現(xiàn)假陰性結(jié)果，從而導(dǎo)致患者安全風(fēng)險(xiǎn)。實(shí)驗(yàn)室一旦確認(rèn)樣品在7天內(nèi)未損失內(nèi)毒素，就可以在“標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程”中規(guī)定樣品的保存時(shí)間或要求的測(cè)試時(shí)間可以延長(zhǎng)到7天，以便每周一次性集中測(cè)試所有保存的樣品，而非每天都耗費(fèi)精力來(lái)測(cè)試樣品。

Sievers Eclipse提高測(cè)試效率

Sievers Eclipse是合規(guī)的內(nèi)毒素測(cè)試平臺(tái)，滿足USP<8>、EP 2.6.14、JP 4.01、ChP<1143&gt;等藥典的要求。此平臺(tái)提供包含5個(gè)參考標(biāo)準(zhǔn)品內(nèi)毒素（RSE，Reference Standard Endotoxin）濃度的嵌入式標(biāo)準(zhǔn)曲線，濃度范圍為50-0.005 EU/mL，一式三份，為每個(gè)樣品提供嵌入式陽(yáng)性產(chǎn)品對(duì)照液（PPC,Positive Product Control）。此平臺(tái)是高通量?jī)?nèi)毒素測(cè)試平臺(tái)，用戶可以在單次測(cè)試中大大增加樣品數(shù)量，從而提高測(cè)試效率、降低總體成本。已經(jīng)或打算延長(zhǎng)樣品保存時(shí)間的用戶在用Eclipse進(jìn)行測(cè)試時(shí)，可以采用鱟試劑“凍融法（Freeze-Thaw）”。事實(shí)證明，在初次重構(gòu)后冷凍鱟試劑，稍后在Eclipse上用解凍的該試劑來(lái)測(cè)試樣品，測(cè)試結(jié)果同非凍融法一致3。

結(jié)論

GMP建議用戶為樣品測(cè)試確定正確的樣品保存時(shí)間。用戶可以進(jìn)行簡(jiǎn)單研究，較大化提高質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室的樣品測(cè)試通量，大大減少總體操作時(shí)間，從而提高實(shí)驗(yàn)室的效率、降低成本。

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