應(yīng)用簡介
       遷移是腫瘤細胞轉(zhuǎn)移過程中bi不可少的環(huán)節(jié)之一。腫瘤細胞與母體瘤分離，穿越血管壁，侵襲周邊正常組織時，需要一定的運動能力。高轉(zhuǎn)移的腫瘤細胞通常具奮較強的運動性。多種物質(zhì)可剌激腫瘤細胞的遷移，如腫瘤細胞分泌因子、生長因子、細胞外基質(zhì)成分(FN、LN)以及一些癌轉(zhuǎn)移靶器官的代謝產(chǎn)物或分泌產(chǎn)物等生長因子對腫瘤細胞有趨化作用，可使其發(fā)生定向運動。測定方法以細胞劃痕法和Transwell小室法。
技術(shù)原理
       細胞劃痕法是簡捷測定細胞遷移運動與修復(fù)能力的方法，類似體外傷口愈合模型，在體外培養(yǎng)皿或平板培養(yǎng)的單層貼壁細胞上，用微量槍頭或其他硬物在細胞生長的中央?yún)^(qū)域劃線，去除中央部分的細胞，然后繼續(xù)培養(yǎng)細胞至實驗設(shè)定的時間，取出細胞培養(yǎng)板，觀察周邊細胞是否生長至中央劃痕區(qū)，以此判斷細胞的生長遷移能力，實驗通常需設(shè)定正常對照組和實驗組，實驗組是加了某種處理因素或藥物、外源性基因等的組別，通過不同分組之間的細胞對于劃痕區(qū)的修復(fù)能力，可以判斷各組細胞的遷移與修復(fù)能力。
實驗方法

技術(shù)總結(jié)
【注意事項】
       1、鋪細胞最好使用6孔板，因為6空板可以保證有相當(dāng)距離的平直劃痕，因為有5條定位線，與劃痕相交，這樣就有10個可固定監(jiān)測點，不作重復(fù)，誤差也很小。
       2、如果連續(xù)監(jiān)測24小時，需要考慮到劃痕縮小是細胞遷移和細胞繁殖共同作用的結(jié)果，而不是單純的細胞遷移。如果要單純的考慮細胞遷移，可以先用si裂霉素（1μg/ml）處理一小時，抑制細胞的分裂，這樣結(jié)果就是細胞遷移的作用了。另外，使用無血清培養(yǎng)基也可以降低增殖對實驗結(jié)果的影響。
       3、照片拍完之后，可以用imageJ來測量劃痕區(qū)域的像素定量比較細胞遷移的速度。
       4、雖然無血清培養(yǎng)可以忽略細胞增殖的影響，但是由于細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)系統(tǒng)整體性的下調(diào)節(jié)，細胞遷移的速度也會慢很多。
【常見問題】
       細胞劃痕時發(fā)現(xiàn)細胞沒有長滿，或是長的太滿？
       R鋪板時的數(shù)量須根據(jù)細胞的形態(tài)、增殖速度、大小進行調(diào)節(jié)，細胞較小或增殖速度慢，鋪板數(shù)量需多于6×105個細胞/孔；細胞較大或增殖速度較快則需少于6×105個細胞/孔；
       細胞鋪板時，前面鋪的孔細胞密度稀，后面鋪的孔細胞密度密？
       R細胞鋪板，細胞單細胞懸液混合后，鋪板過程中需要邊鋪板邊晃動管子，保證細胞在懸液中均勻分布；
       拍出來的照片背景顏色不一或亮度不一？
       R在拍照前進行白平衡；固定曝光時間。作為腫瘤細胞轉(zhuǎn)移研究中的重要角色，這個任重道遠的過程需要很多bi不可少的步驟，準(zhǔn)確易行也是對實驗的要求之一。