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流式細(xì)胞技術(shù)科研實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù)介紹

閱讀:236          發(fā)布時(shí)間:2024-9-24
流式細(xì)胞技術(shù)


應(yīng)用簡(jiǎn)介
       流式細(xì)胞技術(shù)(flowcytometry,FCM)是利用流式細(xì)胞儀進(jìn)行的一種單細(xì)胞定量分析和分選技術(shù)。流式細(xì)胞術(shù)是單克隆抗體及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)、激光和電子計(jì)算機(jī)科學(xué)等高度發(fā)展及綜合利用的高技術(shù)產(chǎn)物。
技術(shù)原理
       流式細(xì)胞儀使懸浮在液體中分散的經(jīng)熒光標(biāo)記的細(xì)胞或微粒逐個(gè)通過(guò)樣品池,同時(shí)由熒光探測(cè)器捕獲熒光信號(hào)并轉(zhuǎn)換成分別代表前向散射角、側(cè)向散射角和不同熒光強(qiáng)度的電脈沖信號(hào),經(jīng)計(jì)算機(jī)處理形成相應(yīng)的點(diǎn)圖,直方圖和加三維結(jié)構(gòu)圖像進(jìn)行分析。用于FCM的樣本是單細(xì)胞懸液,可以是血液、懸浮細(xì)胞培養(yǎng)液、各種體液、新鮮實(shí)體瘤的單細(xì)胞懸液以及石蠟包埋組織的單細(xì)胞懸液等。
服務(wù)內(nèi)容
       1、細(xì)胞表面分子的檢測(cè)與分析;
       2、細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞核內(nèi)抗原檢測(cè)與分析,如胞內(nèi)細(xì)胞因子、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg,CD4+CD25+Foxp3+);
       3、細(xì)胞凋亡的檢測(cè)與分析——如PI單染法、Annexin-V-PI復(fù)染法、末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù)(TUNEL)、細(xì)胞周期特異性細(xì)胞凋亡的檢測(cè)(PI-Annexin-V,PA法);
       4、DNA含量檢測(cè)與細(xì)胞周期的分析——如藥物對(duì)細(xì)胞周期的影響、流式細(xì)胞核型分析;
       5、細(xì)胞增殖的檢測(cè)與分析;

流式細(xì)胞分選儀基本原理
技術(shù)特點(diǎn)
       1、少量細(xì)胞分選時(shí),流式細(xì)胞分選精確度高(99%以上),速度快。目前,先進(jìn)的流式細(xì)胞儀的分選速度可達(dá)25000個(gè)細(xì)胞/秒以上,比傳統(tǒng)的分選速度提高了很多倍,原來(lái)需要一天的工作現(xiàn)在只需要幾小時(shí)就能完成。不過(guò)流式細(xì)胞儀分離細(xì)胞的量還是有一定的限制,一次分離的最大合理量約為108個(gè)細(xì)胞。如果細(xì)胞量超過(guò)109個(gè),則需要耗費(fèi)10小時(shí)以上,分選后細(xì)胞的活力會(huì)受到很大的影響。
       2、可以同時(shí)進(jìn)行多個(gè)Marker分選,正選負(fù)選同時(shí)進(jìn)行。以前的流式細(xì)胞儀只能給液滴充上正電荷或負(fù)電荷,因此在電場(chǎng)中只能向左或向右偏轉(zhuǎn),即兩路分選?,F(xiàn)在的儀器可以給液滴充以不同的電量,從而調(diào)整液滴的偏轉(zhuǎn)角度,實(shí)現(xiàn)多路分選。BD的FACSAria流式細(xì)胞儀就可以進(jìn)行四路分選。
       3、不僅僅限于表面抗原,流式細(xì)胞儀可以根據(jù)任何能檢測(cè)到的發(fā)光度(如細(xì)胞體積)或熒光(如DNA、RNA或蛋白含量,酶活性,特異抗原)散射度差異來(lái)分離細(xì)胞。如果能保證流式細(xì)胞儀的無(wú)菌狀態(tài),那么分選后的細(xì)胞還可以進(jìn)行培養(yǎng)或其他分析。
       4、如果只是偶爾做幾次細(xì)胞分選的話,用流式分選還是比較劃算的,只需要準(zhǔn)備樣品和抗體,交納一定的儀器使用費(fèi)即可,不需要購(gòu)買配套的設(shè)備。
 
 


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