詳細介紹
pCMV / pCAG-LifeAct質(zhì)粒 現(xiàn)貨
pCMV / pCAG-LifeAct質(zhì)粒 現(xiàn)貨
應(yīng)用領(lǐng)域
- 細胞骨架組織:
-無毒肌動蛋白可視化 -熒光染色 - 細胞骨架動力學(xué):
-細胞過程中的肌動蛋白動力學(xué)
- 活細胞成像 和顯微鏡檢查
技術(shù)特點
- 用于瞬時和穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染
- *的生物相容性-活體樣品的無毒染色
技術(shù)指標(biāo)
存儲 | –20°C |
TagGFP2(Ex max / Em max) | 483/506納米 |
TagRFP(Ex max / Em max) | 555/584納米 |
表達載體 | 哺乳動物 |
發(fā)起人 | CMV或CAG |
交貨 | 凍干 |
真核生物抗性 | 新霉素(Geneticin,G418) |
觀看我們的電影:
p CMV LifeAct-TagGFP2 轉(zhuǎn)染的原代樹突小鼠細胞中肌動蛋白動態(tài)的活細胞成像。
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請在此處找到有關(guān)肌動蛋白可視化的更多詳細信息。
在此處下載完整的“ Actin可視化”應(yīng)用指南,以PDF格式。
矢量地圖
pCAG-LifeAct-TagGFP2
pCAG-LifeAct-TagRFP
pCMV-LifeAct-TagGFP2
pCMV-LifeAct-TagRFP
實驗示例:攝取疏螺旋體期間人類巨噬細胞細胞骨架的重組。
疏螺旋體細菌是萊姆病的病因,也稱為萊姆疏螺旋體病。為了防止疏螺旋體的散播,已證明必需被巨噬細胞攝取和消除。該過程涉及巨噬細胞骨架,特別是肌動蛋白微絲的動態(tài)重組。
在該實驗中,使用LifeAct質(zhì)粒來可視化疏螺旋體吞噬過程中人巨噬細胞中的肌動蛋白細胞骨架重組。
原發(fā)性人類巨噬細胞對疏螺旋體的吞噬作用。共聚焦z堆棧的延時電影,顯示表達RFP-LifeAct(紅色)的主要人類巨噬細胞,內(nèi)化了幾個表達GFP的螺旋體(綠色)以及富含肌動蛋白的細胞突起。序列41分鐘 Mirko Himmel博士和Stefan Linder教授,德國漢堡埃彭多夫大學(xué)的數(shù)據(jù),
LifeAct:在活細胞中可視化F-Actin的多功能工具
LifeAct是一種17個氨基酸的肽,來源于釀酒酵母的一種蛋白質(zhì)。LifeAct對活的或固定的真核細胞和組織中的絲狀肌動蛋白(F-actin)結(jié)構(gòu)進行染色。
請在此處找到有關(guān)LifeAct的詳細信息。
當(dāng)需要瞬時或穩(wěn)定表達LifeAct時,LifeAct-Plasmids可用于多種細胞類型。在這種情況下,研究人員可以在兩種不同的啟動子之間選擇,CMV(巨細胞病毒)或CAG(修飾的雞β-肌動蛋白)。對于許多標(biāo)準(zhǔn)細胞系,CMV啟動子是選擇,因為它可導(dǎo)致LifeAct的強表達。但是,在處理敏感細胞(例如神經(jīng)元或胚胎干細胞)時,通常建議使用CAG啟動子,因為它沒有病毒來源,并且不太可能干擾細胞防御機制(“沉默機制”) 。
用pLifeAct轉(zhuǎn)染細胞后,使用熒光標(biāo)記TagGFP2或TagRFP **觀察F-肌動蛋白。細胞系的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染可對各種應(yīng)用進行長期的肌動蛋白染色。
腺病毒載體可用于難以轉(zhuǎn)染的細胞或需要高達100%轉(zhuǎn)基因表達的細胞。在這種情況下,也可以在上述兩個啟動子之間進行選擇。
此外,還提供了不同的穩(wěn)定細胞系,有助于延長日常實驗室生活。您可以立即開始執(zhí)行實驗,而無需費時費力地生成穩(wěn)定的細胞系,同時仍可確保高質(zhì)量的標(biāo)準(zhǔn)。
方法比較:使用LifeAct在活細胞中可視化F-Actin
LifeAct-Plasmid | LifeAct-mRNA | LifeAct蛋白 | LifeAct- | LifeAct- | |
方法適用于1 | |||||
細胞系 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
原代細胞 | + | +++ | ++ | +++ | +++ |
非哺乳動物細胞 | -- | + | + | -- | -- |
轉(zhuǎn)染穩(wěn)定性 | |||||
短暫的 | 是 | 是 | 是 | 是 | 沒有 |
穩(wěn)定 | 是 | 沒有 | 沒有 | 沒有 | 是 |
協(xié)議與分析 | |||||
協(xié)議簡單 | +++ | ++ | ++ | +++ | +++ |
LifeAct讀出開始 | 1-2天 | 幾個小時 | 幾分鐘 | 1-2天 | 1-2天 |
LIFEACT讀出持續(xù)時間 | 幾天 | 幾天 | 多1天 | 幾天 | 幾天 |
信號強度 | +++ | +++ | + | +++ | +++ |
額外好處 | |||||
防止過度表達的 假象 | -- | + | +++ | + | + |
預(yù)防病毒反應(yīng) | +++ | +++ | +++ | -- | -- |
轉(zhuǎn)移 方法的生物相容性 | + | +++ | +++ | ++ | ++ |
肌動蛋白功能 | +++ | +++ | +++ | +++ | +++ |
安全考慮 | |||||
生物安全等級 | BSL1 | -- | -- | BSL2 | BSL2 |
1并非所有這些組合都已在所有指示的細胞類型中進行了測試。我們鼓勵您使用此表作為指導(dǎo),以了解如何地使用LifeAct系統(tǒng)。
注:楊清辰發(fā)布