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詳細介紹
I型膠原，鼠尾 現(xiàn)貨
I型膠原，鼠尾 現(xiàn)貨
應用范圍：
- 體內樣基質中的3D細胞培養(yǎng)
- 在3D環(huán)境中進行活細胞成像
- 為類動物體和球體創(chuàng)建3D支架
- 使用µ-Slide Chemotaxis在3D膠原蛋白凝膠中進行趨化性測定
- 懸浮細胞（例如白細胞）的細胞遷移測定
- 用薄膠原蛋白層覆蓋細胞培養(yǎng)容器以促進細胞附著
- 2D與3D環(huán)境中的細胞分化研究
- 低自發(fā)熒光，非常適合熒光顯微鏡
技術特點：
- 來自大鼠肌腱的高質量純化蛋白
- 高度標準化的制造流程和嚴格的質量控制
- 溫和的制造工藝可實現(xiàn)的誕生率
- 提供詳細的協(xié)議，易于處理
- 在–20°C的溫度下運輸和存儲，以提供明確的質量和可重復性
- 提供2種濃度：標準應用為5 mg / ml，特殊應用為10 mg / ml的高濃度溶液
- 市場上的自然交聯(lián)（質量等級）
- 高粘度：推薦用于高粘度溶液的移液器
- 低自發(fā)熒光
規(guī)格：
| 原始資料 | 大鼠尾肌腱 |
| 出現(xiàn) | 光學透明粘稠液體 |
| 萃取 | 非胃蛋白酶酸 |
| 純度 | 通過SDS PAGE> 90％ |
| 不育性 | 無菌，用于細胞培養(yǎng) |
| 質量 | 經測試發(fā)現(xiàn)DNA，細菌，真菌和支原體呈陰性 |
| 生長因子 | 沒有 |
| 公式 | 提供17.5 mM乙酸（0.1％） |
| pH值 | 3.8 |
| 功能控制 | 細胞培養(yǎng)中的3D凝膠化和2D涂層測試 |
| 存儲 | –20°C，避免多次冷凍和解凍循環(huán) |
注意：我們建議將5 mg / ml的膠原蛋白溶液用于3D凝膠和培養(yǎng)皿的薄涂層。由于其高濃度（和高粘度），10 mg / ml膠原蛋白溶液特別適用于特殊應用，例如支架和生物打印。
請注意，該產品僅供研究使用。如果您對GMP級膠原蛋白感興趣，請通過以下方式與我們聯(lián)系：license@ibidi.de
使用膠原蛋白作為體內 3D細胞培養(yǎng)基質
膠原蛋白是結締組織的主要成分，在哺乳動物體內含量豐富。它廣泛用于3D細胞培養(yǎng)中以模擬生物細胞外基質，或用作促進細胞附著的涂層。
許多細胞自然地在三維環(huán)境中生長。在體外培養(yǎng)時，細胞附著在平坦的2D表面上，其行為可能與在3D凝膠基質中時不同。在許多情況下，3D環(huán)境與體內情況非常相似，在計劃細胞培養(yǎng)測定時應考慮到這種情況。
附著在2D表面上的HT-1080癌細胞的顯微鏡和示意圖（左），并嵌入到3D I型膠原大鼠尾巴基質中（右）。
膠原蛋白結構
膠原蛋白是由三個α鏈組成的纖維蛋白。它們結合形成繩狀的三重螺旋，從而為細胞外基質（ECM）提供拉伸強度。α鏈包含GXY重復序列，其中包括甘氨酸（G），該氨基酸非常適合三螺旋。通常，X和Y代表羥脯氨酸和脯氨酸，它們是膠原蛋白穩(wěn)定性的關鍵成分。三重螺旋以自組織的方式聚集并形成原纖維。在體內，原纖維聚合成纖維形成組織，例如肌腱或真皮。
用于體外實驗的膠原蛋白是從動物組織中酸提取或酶提取的。在酸性條件下（低pH），纖維分解成可溶性原纖維。在某些提取方法中，胃蛋白酶被用來促進膠原蛋白的提取。然而，胃蛋白酶也一定程度地消化膠原蛋白，這導致天然纖維交聯(lián)活性顯著降低。
與胃蛋白酶提取的膠原蛋白（通常來自牛皮膚）不同，ibidi I型??膠原蛋白的大鼠尾巴是酸性提取的。這以及非常溫和的制造過程可以保持大的誕生率。
膠原蛋白的結構
膠原蛋白聚合
在酸性溶液中，膠原原纖維以未定向的方式存在。膠原原纖維之間僅形成氫鍵，從而使溶液具有高粘度。更改為中性pH會使原纖維聚合成纖維。該聚合產生三維膠原蛋白凝膠。所用膠原蛋白的誕生水平決定了膠原蛋白網絡中纖維交聯(lián)的水平。天然（非胃蛋白酶提取的）膠原蛋白表現(xiàn)出高水平的交聯(lián)，而胃蛋白酶化的膠原蛋白溶液形成的體內樣凝膠較少。
ibidi I型??膠原蛋白大鼠尾巴由于蛋白質濃度高而具有很高的粘度，尤其是在10 mg / ml時。pH驅動的聚合如下改變其特性：
| 非聚合膠原 | 聚合膠原 | |
| 宏觀光學外觀 | 透明至微乳白色 | 白色，渾濁 |
| 顯微光學外觀 | 清晰，無結構 | 原纖維網絡，建立在顯微鏡下可見的纖維 |
| 黏度 | 很高，但仍在流動 | 不流動 小變形（例如，用移液器吸頭造成的）會破壞結構 |
| 移液 | 可以用特殊的移液器吸取 高粘度液體 | 不能進行規(guī)定的移液，任何機械力都會破壞結構和機械性能 |
進一步閱讀：
分子細胞生物學，James Darnell等。書號0-7167-2380-8
Wolf K等。（2013）細胞遷移的物理極限：通過ECM空間和核變形控制以及通過蛋白水解和牽引力進行調節(jié)。J細胞生物學 201（7）：1069–84。10.1083 / jcb.201210152。
閱讀摘要
應用實例
在膠原蛋白基質中遷移HT-1080癌細胞的3D活細胞成像
將表達LifeAct的HT-1080細胞（綠色）接種在µ-Slide趨化性中的1.5 mg / ml I型膠原蛋白大鼠尾巴層（白色）中。通過使用水浸物鏡40x / 1.2在Zeiss共聚焦顯微鏡LSM 880 AxioObserver上每300秒拍攝一張照片來記錄細胞遷移。
3D膠原I凝膠對FCS梯度的內皮細胞趨化性
將人類臍靜脈內皮細胞（HUVEC）的活細胞成像嵌入在1.5μg/ ml I型膠原趨化性凝膠中，并向胎牛血清遷移。注意：在趨化過程中，相互連接的單元格形成字符串。相襯，4倍物鏡，24小時。
HT-1080癌細胞在3D膠原蛋白凝膠中的侵襲
將侵襲性人纖維肉瘤癌球（HT-1080）嵌入I型膠原大鼠尾凝膠中。在µ-Slide 8孔中記錄了48個小時對凝膠基質的浸潤。4倍物鏡，明場。
在3D膠原蛋白凝膠中發(fā)芽內皮細胞
人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）球狀體的活細胞成像，該活體成像嵌入由I型膠原（大鼠尾巴）制成的3D凝膠中。根據(jù)應用說明26“制造I型膠原蛋白”，用*內皮細胞生長培養(yǎng)基（PromoCell）制成的大鼠尾I型膠原蛋白凝膠（1 mg / ml）。將VEGF-165（50 ng / ml）添加到培養(yǎng)基中以誘導出芽活性。
在µ-Slide 8孔中記錄了44個小時的凝膠基質發(fā)芽過程。10倍和4倍物鏡，明場。
注：楊清辰發(fā)布
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