凡人修煉脂質(zhì)體秘籍4----膽固醇篇

上篇講到脂質(zhì)體輔料總覽，磷脂類的輔料種類很多，我們將在后面的篇章具體描述。實(shí)際上脂質(zhì)體的關(guān)鍵輔料只有兩類，磷脂類和膽固醇。制備脂質(zhì)體，膽固醇是不可少的輔料，除了溫敏脂質(zhì)體，為了降低相變溫度時(shí)脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，迅速釋放藥物，可不添加膽固醇。本篇主要介紹膽固醇的理化性質(zhì)，制造及應(yīng)用。

1.脂質(zhì)體制劑，為什么膽固醇不可少

膽固醇屬于兩親物質(zhì)，同時(shí)具有親油和親水兩種基團(tuán)，但是其親油性較親水性強(qiáng)，與磷脂相互作用形成脂質(zhì)體時(shí)可嵌入到磷脂分子之間，調(diào)節(jié)膜結(jié)構(gòu)及性質(zhì)，提高脂質(zhì)體功能性。此外，還可調(diào)節(jié)磷脂雙分子層膜的流動(dòng)性，使膜通透性降低，減少藥物滲漏；可使脂膜維持一定柔韌性，增強(qiáng)脂質(zhì)體囊泡抗擊外部條件變化的能力；還能對(duì)磷脂的氧化有一定保護(hù)作用。膽固醇對(duì)磷脂的相變具有雙相調(diào)節(jié)作用。在相變溫度以上時(shí)，膽固醇可抑制磷脂分子中脂肪酸烴鏈的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)化運(yùn)動(dòng)，減少歪扭構(gòu)象數(shù)量，從而降低膜的流動(dòng)性；在相變溫度以下時(shí)，膽固醇又可誘發(fā)磷脂分子的脂肪酸烴鏈產(chǎn)生歪扭構(gòu)象變化，從而阻止膠晶態(tài)出現(xiàn)，減少剛性，增加柔韌性。膽固醇又有類似增塑劑樣作用。在脂質(zhì)體載體中提高膽固醇的比例可增加脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，降低滲漏率。有報(bào)道，在制備脂質(zhì)體時(shí)添加30-50%的膽固醇，可以提高脂質(zhì)體的載藥量和穩(wěn)定性。所以在脂質(zhì)體中膽固醇不可少。

2.膽固醇的理化性質(zhì)

早在18世紀(jì)人們已從膽石中發(fā)現(xiàn)了膽固醇，1816年化學(xué)家本歇爾將這種具脂類性質(zhì)的物質(zhì)命名為膽固醇。膽固醇是一種環(huán)戊烷多氫菲的衍生物。膽固醇為白色粉末狀固體，室溫下穩(wěn)定性較好，但對(duì)光敏感，因此應(yīng)該避光、密封保存，保存得當(dāng)，有效期可達(dá)5年。在三lv甲烷中易溶（1g/4.5ml），在yi醚中溶解（1g/2.8ml），在丙酮、乙酸乙酯或石油醚中略溶，在乙醇中微溶，在水中不溶（0.2mg/100ml）。

3.膽固醇的制造工藝

3.1動(dòng)物組織提取

動(dòng)物組織提取法是以新鮮動(dòng)物內(nèi)臟、骨髓及腦為原料，工藝為(1)濃縮提取:將豬牛羊腦子曬干粉碎放入浸泡罐提取,回收罐中回收,循環(huán)浸泡提取；(2)酸化:丙酮提取液濾出放入到反應(yīng)罐中加入乙醇和硫酸加溫酸化；(3)皂化:酸化的膽固醇過濾放入反應(yīng)罐內(nèi)加入乙醇和氫氧化鈉加溫皂化; (4)清洗:皂化后的膽固醇放入反應(yīng)罐中加熱,過濾,冷卻結(jié)晶。此類工藝簡(jiǎn)單可行，是目前國(guó)內(nèi)膽固醇的主要生產(chǎn)工藝，然而易受到原料供應(yīng)的限制，且有殘留致病基因的可能。

3.2羊毛脂提取

羊毛油脂是羊毛工業(yè)的副產(chǎn)品，羊毛油脂中膽固醇含量較高，約10%至15%，且成品低廉來源豐富，穩(wěn)定性及安全性高，國(guó)外大部分膽固醇都是以羊毛脂為原料。但羊毛脂中的膽固醇多與羊毛脂酸結(jié)合以酯的形式存在，而且膽固醇類似物很多，所以要得到純品，對(duì)技術(shù)要求很高。通過皂化工藝使膽固醇游離出來，皂化得到的膽固醇還含有大量的脫氫膽固醇、二氫膽固醇等類似物，因分子結(jié)構(gòu)相似，性質(zhì)相近，給分離帶來困難，成為工藝難點(diǎn)和關(guān)鍵點(diǎn)。但是，隨著對(duì)藥品安全性的重視，羊毛脂來源的膽固醇必定會(huì)逐漸取代動(dòng)物內(nèi)臟來源的膽固醇。江西天新藥業(yè)最新申請(qǐng)制備工藝如下：

(1)將羊毛脂、氧化鈣、稀釋劑、水及相轉(zhuǎn)移催化劑混合，升溫進(jìn)行皂化反應(yīng)，獲得羊毛脂皂化產(chǎn)物；

 (2)從羊毛脂皂化產(chǎn)物中分離獲得羊毛脂醇；

 (3)在水、乙醇、有機(jī)溶劑的存在下，使羊毛脂醇與氯化鈣接觸獲得膽固醇氯化鈣絡(luò)合物；

 (4)將膽固醇氯化鈣絡(luò)合物進(jìn)行解絡(luò)，固液分離獲得膽固醇粗品；

 (5)將膽固醇粗品與低級(jí)有機(jī)酸和低級(jí)醇混合溶劑混合，重結(jié)晶獲得膽固醇成品。

4.膽固醇應(yīng)該怎么選擇

膽固醇可提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，是制備脂質(zhì)體*的物質(zhì)。膽固醇輔料如何挑選，必須是已通過關(guān)聯(lián)審評(píng)，注射級(jí)和高純度。

艾偉拓代理的膽固醇，為日本進(jìn)口，純度高達(dá)99%，在國(guó)際上多個(gè)上市脂質(zhì)體產(chǎn)品中長(zhǎng)期應(yīng)用。不同于大多數(shù)從動(dòng)物內(nèi)臟中提取膽固醇的工藝，艾偉拓供應(yīng)的膽固醇采用的原料為羊毛脂，因此產(chǎn)品雜質(zhì)相對(duì)較少，是脂質(zhì)體研發(fā)和生產(chǎn)的*。DMF號(hào):24780， EINECS號(hào):200-353-2，備案登記號(hào):F20170000106。

5.膽固醇在上市脂質(zhì)體及工藝中的用法用量舉例

制備普通載藥脂質(zhì)體，膽固醇(供注射用)是必須的添加物，用量一般為CHO:PC=0.3:1（摩爾比）。因PC和藥物的不同，存在膽固醇的最佳用量。在一定范圍內(nèi)，脂質(zhì)體的粒徑、氧化穩(wěn)定性、物理穩(wěn)定性與膽固醇添加量成正相關(guān)，超出范圍時(shí)，超過膜負(fù)荷，會(huì)造成部分脂質(zhì)體破裂。另外，膽固醇的添加會(huì)對(duì)膜相變溫度有一定影響，臨界值以內(nèi)使相變溫度降低，臨界值以上，使相變溫度升高。形成脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)時(shí)，膽固醇嵌插在磷脂雙分子層上，因此可調(diào)節(jié)膜的流動(dòng)性，作用隨溫度的不同而改變。在相變溫度以上，它能使磷脂的脂肪酸鏈運(yùn)動(dòng)性減弱，從而降低磷脂分子的流動(dòng)性;而在相變溫度以下時(shí)，則可通過阻止磷脂脂肪酸鏈的相互作用，緩解低溫引起的磷脂分子流動(dòng)性劇烈下降。

膽固醇已廣范應(yīng)用于上市脂質(zhì)體產(chǎn)品處方，并在多個(gè)臨床階段的脂質(zhì)體項(xiàng)目中得以應(yīng)用，如順鉑脂質(zhì)體Lipoplatino ，多柔比星Doxil，兩性霉素 AmBisome，柔紅霉素DaunoXome，布卡因EXPAREL，維替泊芬Visudyne等。

膽固醇用法用量舉例如下：

5.1兩性霉素脂質(zhì)體注射液(Ambisome，1990)

膽固醇用法:與磷脂和藥物一起溶于有機(jī)溶劑，旋蒸、抽真空制膜。用量：52mg/瓶

5.2多柔比星脂質(zhì)體注射液(Doxil, 1995)

膽固醇用法:注入法，與磷脂一起溶于有機(jī)溶劑，快速攪拌條件下緩慢勻速注入適當(dāng)濃度的硫酸銨溶液。用量：3.19 mg/mL

5.3布卡因脂質(zhì)體注射液(Exparel, 2011)

膽固醇用法:與磷脂--起溶于有機(jī)溶劑，快速剪切條件下與含有布卡因的水溶液混合、乳化形成初乳。用量：8.2mg/ml

6.在近期國(guó)內(nèi)脂質(zhì)體研發(fā)中的磷脂與膽固醇比例

查閱了近期國(guó)內(nèi)脂質(zhì)體研發(fā)報(bào)道，摘錄制備工藝中磷脂與膽固醇比例舉例如下：

譚李玉等制備了杜鵑蘭酮脂質(zhì)體,確定膽固醇與大豆磷脂質(zhì)量比為1:8。

嵇晶等制備丹參總酚酸復(fù)合磷脂脂質(zhì)體，磷脂與膽固醇質(zhì)量比為3∶1。

屈曉梅等制備了舒馬普坦脂質(zhì)體，卵磷脂/膽固醇比5.4:1,。

張璐等制備了紫杉醇五味子乙素脂質(zhì)體，磷脂44 mg、膽固醇8 mg。

王溪淼制備卡培他濱與奧沙利鉑復(fù)方脂質(zhì)體，磷脂與膽固醇之比為3:1。

邢宇等制備了銀杏內(nèi)酯B脂質(zhì)體， 160 mg蛋黃卵磷脂、40 mg膽固醇。

王成祥等制備了鹽酸阿霉素-黃芪甲苷脂質(zhì)體，磷脂濃度為8 mg/mL,磷脂與膽固醇比為10∶1,藥脂比為1∶5。

呂佳佳等制備紫杉醇/姜黃素雙載藥脂質(zhì)體，磷脂濃度40 mg/mL,磷脂-膽固醇比4∶1,藥脂比1∶40,水化介質(zhì)為pH 6.5的PBS緩沖液。

膽固醇是脂質(zhì)體制劑中的主要成分之一，對(duì)維持脂質(zhì)體膜結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性等起重要作用。制備脂質(zhì)體，必須選擇通過關(guān)聯(lián)審評(píng)，注射級(jí)和高純度的膽固醇?，F(xiàn)在膽固醇在脂質(zhì)體制造中不可少，但即將部分替代或全部替代。已有報(bào)道采用與膽固醇結(jié)構(gòu)相似且具一定藥理活性的甾醇、皂苷類化合物替代脂質(zhì)體處方中膽固醇，同樣能形成性質(zhì)良好的脂質(zhì)體。

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15.王成祥等人，鹽酸阿霉素-黃芪甲苷脂質(zhì)體制備工藝研究，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào). 2021,23(06)

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