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當(dāng)前位置:靶點科技(北京)有限公司>>技術(shù)文章>>BroadPharm寡核苷酸探針偶聯(lián)抗體注意事項
寡核苷酸可以通過硫醇-馬來酰亞胺和腙偶聯(lián)方法與抗體/蛋白質(zhì)偶聯(lián)。硫醇-馬來酰亞胺方法通常使用雙功能接頭(例如 SMCC)進(jìn)行。然而,SMCC修飾的蛋白質(zhì)極不穩(wěn)定,并且經(jīng)常自反應(yīng),因為它通常含有胺和硫醇基團(tuán),導(dǎo)致大量的同源交聯(lián)。當(dāng)存在其他硫醇基團(tuán)時,共軛鍵可交換。在腙偶聯(lián)方法中,共軛反應(yīng)基于肼和醛之間的反應(yīng)。盡管使用了催化劑,但這種方法的收率很低。分子的大小和官能團(tuán)的不可接近性導(dǎo)致產(chǎn)量低。此外,聯(lián)動穩(wěn)定性也是一個問題。
BroadPharm的MagicLink™技術(shù)通過結(jié)合PEG和專有的交聯(lián)化學(xué)解決了所有問題。MagicLink™ 化學(xué)試劑盒和試劑盒根本不需要 TCEP、DTT 或催化劑!
首先,抗體與LINK NHS酯反應(yīng),將LINK引入抗體中。此外,胺修飾的寡核苷酸與MAGIC NHS酯反應(yīng),將MAGIC引入寡核苷酸結(jié)構(gòu)中。其次,在純化活化后的寡核苷酸和抗體后,它們立即相互反應(yīng),產(chǎn)生具有穩(wěn)定環(huán)連接的抗體-寡核苷酸偶聯(lián)物。
原理示意圖:
注意事項:
1.單鏈寡核苷酸的堿基長度是10-120個之間
2.雙鏈寡核苷酸的堿基長度是80個以內(nèi)
3.寡核苷酸探針在合成時需要修飾,合成時備注好
4.待偶聯(lián)抗體或者蛋白的保存在PBS里面,濃度不低于1mg/ml。一般1-10mg/ml均可
5.活化后的寡核苷酸和活化后的抗體都要盡快使用,不要超過2小時
產(chǎn)品使用已發(fā)表文獻(xiàn):
1.McMahon NP, Jones JA, Kwon S, et al. Oligonucleotide conjugated antibodies permit highly multiplexed immunofluorescence for future use in clinical histopathology. J Biomed Opt. 2020;25(5):1-18. doi:10.1117/1.JBO.25.5.056004
2.Wiener, J., Kokotek, D., Rosowski, S. et al. Preparation of single- and double-oligonucleotide antibody conjugates and their application for protein analytics. Sci Rep 10, 1457 (2020). doi.org/10.1038/s41598-020-58238-6
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