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半胱氨酸依賴性過(guò)氧化物還原酶 NADH 過(guò)氧化物酶時(shí),科學(xué)家就意識(shí)到需要化學(xué)探針來(lái)檢測(cè)和鑒定蛋白質(zhì)中氧化的半胱氨酸殘基,尤其是在亞磺酸狀態(tài)下。NADH過(guò)氧化物酶的自然氧化形式含有半胱氨酸亞磺酸(加上一種氧化的、非共價(jià)結(jié)合的FAD),但這并不那么容易證明(Poole & Claiborne,1989年,J Biol Chem 264,12330)。
經(jīng)過(guò)研究,科學(xué)家開創(chuàng)了使用NBD氯化物作為捕獲劑,能夠區(qū)分蛋白質(zhì)上的硫醇和亞磺酸部分(Ellis & Poole,1997,生物化學(xué)36,15013),但這種方法的實(shí)用性主要限于只有一種或少量半胱氨酸的純化蛋白質(zhì)。
為了檢驗(yàn)亞磺酸形成在生物系統(tǒng)中起的作用比人們認(rèn)識(shí)到的要廣泛得多的假設(shè),科學(xué)家想出一種試劑來(lái)標(biāo)記蛋白質(zhì)中的亞磺酸使用與報(bào)告基因組相連的 dimedone 樣試劑。預(yù)算科學(xué)家們開發(fā)了用于生化檢測(cè)的第一批試劑(DCP-Bio1 和 DCP-N3)。蛋白質(zhì)氧化還原調(diào)節(jié)中半胱氨酸亞磺酸檢測(cè)探針DCP-Bio1。
DCP-Bio1 基于二美酮,包含一個(gè)生物素標(biāo)簽,使其與多種技術(shù)和分析形式兼容。DCP-Bio1 是一種廣泛使用的、可滲透細(xì)胞的生物素標(biāo)記的 1,3-二羰基探針,對(duì)亞磺酸具有選擇性反應(yīng)性。它對(duì)體外和體內(nèi)次磺?;鞍踪|(zhì)或肽的親和捕獲非常有用,并且與下游應(yīng)用兼容,包括 Western blot、蛋白質(zhì)組學(xué)和成像分析。
產(chǎn)品特色:
-包含可切割的生物素標(biāo)簽
-在 pH 值為 6.0 - 8.0 時(shí)與半胱氨酸亞磺酸 (-SOH) 穩(wěn)定、可重現(xiàn)的結(jié)合
-非常適合體外和體內(nèi)應(yīng)用
-與 WB、ELISA 和親和分離兼容
工作原理:
蛋白質(zhì)中氧化還原敏感的半胱氨酸殘基可能作為氧化信號(hào)傳導(dǎo)的重要組成部分或氧化應(yīng)激的傳感器。半胱氨酸亞磺酸修飾是研究細(xì)胞內(nèi)生物信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的人感興趣的新興領(lǐng)域。
蛋白質(zhì)中半胱氨酸亞磺酸的形成是由于溫和的氧化劑(如過(guò)氧化氫、烷基氫過(guò)氧化物和過(guò)氧亞硝酸鹽)對(duì)敏感的半胱氨酸殘基進(jìn)行氧化修飾。這些次磺酸修飾的蛋白質(zhì)可以通過(guò)它們與 dimedone 形成加合物的能力來(lái)鑒定,但該試劑沒(méi)有為此類加合物提供光譜或親和標(biāo)簽,以便以后分析。DCP-Bio1 可用于有效檢測(cè)蛋白質(zhì)氧化還原調(diào)節(jié)中半胱氨酸亞磺酸的形成,并且在存在生物素標(biāo)記的情況下,DCP-Bio1 與多種標(biāo)記后分析和分析形式兼容。
產(chǎn)品結(jié)構(gòu):
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