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技術文章

Zeta Life 高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑-高效轉(zhuǎn)染

閱讀:1480          發(fā)布時間:2021-11-25

Zeta Life Advanced 系列高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑使用說明

品牌:Zeta Life

名稱:Advanced 系列高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑


㈠注意事項

1、質(zhì)粒DNA 必須溶解于無菌雙蒸水或超純水,但不能溶解于Buffer。溶解于Buffer

的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率會下降80%左右,甚至會轉(zhuǎn)染失敗。

2、質(zhì)粒必須去除內(nèi)毒素,內(nèi)毒素對細胞將產(chǎn)生很大的細胞毒性,會導致轉(zhuǎn)染效率下降

70%-80%左右,甚至導致轉(zhuǎn)染失?。ㄍ扑]使用Qiagen、TIANGENOmega 去內(nèi)毒素質(zhì)粒提

取試劑盒)。

3、Zeta Life Advanced 系列高效DNA RNA 轉(zhuǎn)染試劑在復合物的制備過程中是絕對不能

用其他任何試劑對核酸或轉(zhuǎn)染試劑進行稀釋,只需將核酸和轉(zhuǎn)染試劑兩者按1:1 比例直接混

合,如果進行了稀釋會導致轉(zhuǎn)染失?。?span>80%的客戶會按Lipo 的方法進行稀釋)。

4、轉(zhuǎn)染試劑與核酸混勻后用移液器吹打10-15 次,室溫孵育10-15 分鐘后即可加入細

胞培養(yǎng)板。

5、轉(zhuǎn)染24 小時后進行正常換液,不能像Lipo2000 一樣轉(zhuǎn)染4-6 小時后換液。

㈡簡易操作說明

一、實驗中核酸準備要求:

1、RNA 濃度20 uM /L

2、質(zhì)粒DNA 濃度200 ng-2 ug/ul 注意:溶解于無菌雙蒸水或超純水;無內(nèi)毒素)。

二、操作流程

1、先將細胞接種到細胞培養(yǎng)板,細胞匯合度在60-80%左右,再進行轉(zhuǎn)染。

2、復合物制備:將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照1:1 關系直接混合,用移液器吹吸10-15 次混

勻,室溫靜止10-15 分鐘。

3、將復合物加入細胞培養(yǎng)板,并輕輕混勻,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

4、轉(zhuǎn)染24 小時后對細胞進行正常換液。

5、質(zhì)粒DNA 轉(zhuǎn)染48-72 小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-96 小時檢測mRNA 或蛋白表

達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選,則在轉(zhuǎn)染后24-48 小時左右加入適量的藥物進行篩選。

siRNA 轉(zhuǎn)染后9 小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率,48-72 小時檢測mRNA 或蛋白表達。

三、以細胞培養(yǎng)板、培養(yǎng)皿、培養(yǎng)瓶為例進行轉(zhuǎn)染試劑、質(zhì)粒DNA siRNA 的用量

 


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