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技術(shù)文章

蛋白質(zhì)印跡(WB)實(shí)驗(yàn)的意義和步驟介紹

閱讀:1251          發(fā)布時(shí)間:2022-8-8

免疫印跡(WB)

免疫印跡是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。免疫印跡(immunoblotting)又稱(chēng)蛋白質(zhì)印跡(Western blotting),是根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測(cè)復(fù)雜樣品中的某種蛋白的方法。該法是在凝膠電泳和固相免疫測(cè)定技術(shù)基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新的免疫生化技術(shù)。由于免疫印跡具有 SDS-PAGE 的高分辨力和固相免疫測(cè)定的高特異性和敏感性,現(xiàn)已成為蛋白分析的一種常規(guī)技術(shù)。免疫印跡常用于鑒定某種蛋白,并能對(duì)蛋白進(jìn)行定性和半定量分析。結(jié)合化學(xué)發(fā)光檢測(cè),可以同時(shí)比較多個(gè)樣品同種蛋白的表達(dá)量差異。

實(shí)驗(yàn)意義

WB用于鑒定能夠被特異性抗體識(shí)別的大分子抗原(通常是蛋白質(zhì)),并測(cè)定抗原的分子量。

實(shí)驗(yàn)步驟

1.蛋白樣品制備

2.電泳分離

3.電轉(zhuǎn)移

4.免疫印跡顯色:ECL顯色系統(tǒng)

結(jié)果展示

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 實(shí)驗(yàn)周期:2-3周

2. 交付標(biāo)準(zhǔn):黑白顯色圖、內(nèi)參、灰度值分析、柱狀圖、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(實(shí)驗(yàn)步驟、試劑、儀器等)

需確認(rèn)的信息

1. 樣本種屬及類(lèi)型,是組織還是細(xì)胞?

2. 需要檢測(cè)目標(biāo)蛋白。

3. 檢測(cè)分樣本數(shù)及分組,每張膜的上樣順序?

4. 是否購(gòu)買(mǎi)一抗,本公司可代購(gòu)。


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