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技術(shù)文章

蛋白修飾-蛋白質(zhì)修飾譜分析介紹

閱讀:482          發(fā)布時(shí)間:2022-8-9


實(shí)驗(yàn)原理

首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物,然后使用液相色譜對(duì)酶解后的肽段混合物進(jìn)行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度,然后通過(guò)高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對(duì)修飾肽段進(jìn)行富集,最后上樣至液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜中進(jìn)行分析,通過(guò)相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫(kù)檢索匹配,一次可鑒定成百上千個(gè)修飾位點(diǎn)。

蛋白分析的應(yīng)用

1. 磷酸化:信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長(zhǎng)發(fā)育及癌癥機(jī)理等;

2.糖基化:蛋白質(zhì)折疊、更新以及免疫應(yīng)答等;

3.乙酰化:基因表達(dá)調(diào)控、細(xì)胞凋亡、細(xì)胞代謝、蛋白質(zhì)穩(wěn)定性以及神經(jīng)退行性病變等;

4.泛素化:細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、DNA修復(fù)以及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等;

5.甲基化:染色質(zhì)結(jié)構(gòu)及轉(zhuǎn)錄調(diào)控等;

6.丙?;?/ 丙二酰化 / 戊二?;?/ 琥珀?;褐饕嬖谟诰€粒體和細(xì)菌中,與代謝過(guò)程密切相關(guān)。

實(shí)驗(yàn)流程

1.蛋白提??;

2.蛋白酶消化;

3.修飾肽段富集

4.LC-MS/MS分析;

4.生信分析。

實(shí)驗(yàn)完成周期及交付標(biāo)準(zhǔn)

1. 周期:6周左右

2. 交付標(biāo)準(zhǔn):質(zhì)譜原始數(shù)據(jù)、蛋白鑒定列表、修飾位點(diǎn)鑒定表、實(shí)驗(yàn)報(bào)告(主要儀器、試劑和實(shí)驗(yàn)方法)

需確認(rèn)的信息

1. 確認(rèn)樣品所屬種屬、分析需求。


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