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WinSera血清使用中需要注意的問題有哪些?
(一)被誤判為污染的“小黑點(diǎn)"
經(jīng)過熱處理的血清,往往沉淀物會增多,而這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察像是污染物,常常會讓研究者誤以為血清遭到污染。然而,把血清放在37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物進(jìn)一步增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴(kuò)增。
我們的經(jīng)驗(yàn)是拿到鏡下去觀察是否為細(xì)菌狀或真菌狀形態(tài)。還有就是做無菌培養(yǎng),取一點(diǎn)血清在培養(yǎng)皿中,在培養(yǎng)箱里培養(yǎng)幾天,觀察沉淀物是否有變化。一般情況下,這些沉淀物并不會影響血清的正常使用,Lab里往往用0.22μM的濾膜過濾一下就繼續(xù)使用了。
(二)解凍血清
解凍血清時,請遵循推薦的分步解凍方法(-20℃→4℃→室溫)。實(shí)驗(yàn)表明,如果血清解凍溫度過高(如-20℃→37℃),很容易產(chǎn)生沉淀。解凍血清時,請隨時搖勻,使溫度和成分均勻,減少沉淀的發(fā)生。請不要長時間將血清放置在37℃環(huán)境中,如果放置時間過長,血清會變得混濁,血清中的許多不穩(wěn)定成分會受到破壞,從而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活很容易引起沉淀物的增加,我們認(rèn)為這一步是不必要的。如需對血清進(jìn)行熱滅活,請遵循56℃、30min原則,隨時搖勻。如果溫度過高、時間過長或搖晃不均勻,沉淀物就會增加。
血清中出現(xiàn)沉淀物的原因有很多,但最常見的是血清中脂蛋白的變性,解凍后血清中還會存在纖維蛋白(形成凝塊的蛋白質(zhì)之一),這也是產(chǎn)生沉淀物的主要原因之一。然而,這些絮狀沉淀物雖然并不影響血清本身的質(zhì)量,但有可能會被誤判為污染物。如果要去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝在無菌離心管中,以1200rpm的速度離心,然后將上清液加入培養(yǎng)基中進(jìn)行過濾。
(三)保存血清
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