SIGMA特級胎牛血清價格
產(chǎn)品名稱:特級胎牛血清
貨號:F8687-500ML F2442-500ML
品牌:SIGMA
規(guī)格:500ml
產(chǎn)品名稱:特級胎牛血清
貨號:0500
規(guī)格:500ml
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如何從T25瓶中轉(zhuǎn)移sf9細(xì)胞?能用蛋白酶消化嗎?
我們推薦使用脫落細(xì)胞的方法,此技術(shù)破壞性最小,生活力最高。通過使用巴斯德吸液管,讓細(xì)胞上培養(yǎng)基流動。作為一種選擇你也可以輕輕拍打培養(yǎng)瓶。只有在絕對必要的情況下,才使用胰消化細(xì)胞。
38.胰消化一個T25瓶的sf9細(xì)胞:
1. 去除培養(yǎng)基。
2. 用2ml 1xPBS(足以覆蓋細(xì)胞表面)洗滌細(xì)胞,去除PBS。
3. 加入2ml 1x胰EDTA(恰好覆蓋細(xì)胞表面)。
4. 37 ℃孵育5到10分鐘。在儀器下檢測看到5分鐘后它們正在向上移動。
5. 向細(xì)胞中加入2ml 細(xì)胞培養(yǎng)液,移入錐形管,用2ml培養(yǎng)液洗瓶壁,移入同一錐形管中。(培養(yǎng)基中的FBS終止了胰的活性。)
6. 離心(1100rpm)沉淀細(xì)胞。去除培養(yǎng)基。
7. 用新的培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。傳代。
39.在Sf9, Sf21, 和high Five細(xì)胞懸浮培養(yǎng)時,肝素的使用量是多少?
為了防止懸浮培養(yǎng)細(xì)胞聚集的形成,使用肝素濃度為10單位/毫升細(xì)胞懸液。
40.在重新凍存sf9細(xì)胞前,它可以傳多少代?隨著傳代的次數(shù)的增加,它的感染能力會降低嗎?
通常情況當(dāng)細(xì)胞經(jīng)過30次傳代后,應(yīng)該返回凍存。無論什么時候計數(shù)時,都應(yīng)該檢查細(xì)胞活力。如果超過95%的細(xì)胞保持有活力和在大約30小時左右加倍,細(xì)胞仍然可以使用。如果活力和加倍時間下降,它們的感染力將不在是有效的。
41.貯存在冰箱中的瓶口已開的培養(yǎng)基,在放置幾天后顏色變紫?
這主要是由于在暴露到周圍的CO2水平時,碳酸氫納導(dǎo)致了pH值的上升。您可以在使用前松開瓶口,在CO2培養(yǎng)箱孵育培養(yǎng)基10-15分鐘,來校正溶液的pH值(確定松開瓶口以保證氣體交換)。
42. 細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,可否繼續(xù)使用?
如果細(xì)胞培養(yǎng)基偶然被凍,您應(yīng)該熔化培養(yǎng)基并觀察是否有沉淀產(chǎn)生。如果沒有沉淀產(chǎn)生,培養(yǎng)基可以正常使用,如果出現(xiàn)沉淀,只能丟棄這些培養(yǎng)基。
43. 無血清培養(yǎng)與有血清培養(yǎng)使用的抗生素量一樣嗎?
當(dāng)在無血清培養(yǎng)基中添加抗生素時,降低至少在有血清培養(yǎng)基中所使用濃度的50%。血清蛋白會結(jié)合和滅活一些抗生素。在無血清培養(yǎng)條件下,抗生素不被滅活,可能對于細(xì)胞達(dá)到毒性水平。
44. 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應(yīng)該在兩到三周內(nèi)使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
45.培養(yǎng)基及其它添加物和試劑可反復(fù)凍融嗎?
大部分添加物和試劑最多可以凍融3次,如果次數(shù)更多都會在包含蛋白的溶液引起一定水平的降解和沉淀,將會影響它的性能。
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SIGMA特級胎牛血清價格保存血清最好方法是什么?
我們建議血清應(yīng)保存在-5℃至-20℃。但是若存放于4℃時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臒o菌容器內(nèi),再放回冷凍。反復(fù)凍融會對血清的品質(zhì)造成不良影響。
② 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?
我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于2-8℃冰箱使之溶解,然后在室溫下使之全溶。但必須注意的是,溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
③ 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?
血清在解凍過程(包括沒有*解凍)或儲存在2-8℃時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如凝集素、纖維蛋白原和玻連蛋白等)可能會聚集成團(tuán),形成絮狀沉淀或外觀混濁;在運輸過程中,由于時間較長,所以往往有少許解凍,因此也可能稍有沉淀,但這些都不影響血清性能。
若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞過濾膜。
④ 何謂熱滅活?
一般是以56℃,30分鐘來處理已解凍的血清,因為此加熱步驟,可以使補體去活化,而補體所參與的反應(yīng)有:溶細(xì)胞,平滑肌的收縮,肥大細(xì)胞和血小板組胺的釋放,增強吞噬作用,淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞的趨化和激活。
⑤ 有必要作熱滅活嗎?
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細(xì)胞的生長只有微小的促進(jìn),或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清質(zhì)量,而造成細(xì)胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱滅活的血清,沉淀物的形成,會顯著增多,這些沉淀物在導(dǎo)致顯微鏡下觀察,像是“小黑點",常常會讓研究者認(rèn)為血清遭受污染,而把血清放進(jìn)37℃環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認(rèn)為是微生物的分裂擴增。
因此我們建議您,若非必須,您可以不做熱滅活處理血清。這樣,不僅節(jié)省您寶貴時間,更確保血清的質(zhì)量。只在做免疫學(xué)研究或培養(yǎng)干細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時才推薦做熱滅活。我公司也有已經(jīng)熱滅活的血清可供選擇。
⑥ 如何減少沉淀物的產(chǎn)生?
我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:
● 解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時,改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。
● 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
● 請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。
● 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,則毋須做此步驟。
若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。