概述

3D石墨烯（3DG）是一種生物相容性導(dǎo)電材料，用于打印電刺激組織，如心臟、骨骼肌和神經(jīng)，以及生物相容性電路。3DG在室溫下打印，打印后可以接種細(xì)胞。按照以下分步過(guò)程進(jìn)行導(dǎo)電組織生物打印。

下面用戶說(shuō)明中提供的推薦制劑可產(chǎn)生一種簡(jiǎn)化的可打印生物材料，可創(chuàng)建可重復(fù)的 3D 打印結(jié)構(gòu)。但是，用戶可以根據(jù)自己的需要修改準(zhǔn)備工作。

材料

1. 3 mL Dimension Inx 3D-石墨烯

2. 生物墨水混合器

3.  5 mL 注射器

4. 14G金屬拉絲針

5. 27G打印針

6. 砂紙印刷面

7. 培養(yǎng)皿

8. 間充質(zhì)干細(xì)胞或其他選擇的細(xì)胞系

9. 間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)培養(yǎng)基

方法

印刷：

1. 將小瓶從 4°C 中取出，使其達(dá)到室溫;

2. 當(dāng)材料從冰箱中取出時(shí)，它看起來(lái)會(huì)變硬，所以在處理之前等待它看起來(lái)很流暢;

3. 用生物墨水混合器劇烈渦旋材料，直至均勻;

• 注意：如果材料溶劑似乎大部分與粉末分離，您可以用膠帶將小瓶固定在渦旋混合器上，并保持至少一小時(shí)。長(zhǎng)時(shí)間混合小瓶將獲得更好的打印體驗(yàn)。

4. 使用 14G 針頭刺穿樣品瓶蓋并繪制打印量 （3 mL），不要將樣品瓶倒置以防止材料損失。3D-石墨烯具有高粘性，因此加載可能需要幾分鐘。我們建議您僅將此樣品瓶用于一次打印會(huì)話。如果您將其用于更多會(huì)話，請(qǐng)確保將其適當(dāng)密封。建議將刺破的蓋子換成實(shí)心蓋子，以便更好地進(jìn)一步存放;

5. 拉拔材料后，取下注射器柱塞和拉絲針;

6. 從柱塞上取下塞子并將其放入注射器中;

7. 將塞子放回注射器中，用柱塞推動(dòng)它，直到它接觸并均勻分布在注射器中的拉出材料。確保在用柱塞推動(dòng)塞子時(shí)，它們不會(huì)重新連接;

8. 放置 27G 打印針并裝入您的 Allevi！

9. 將粘合劑打印表面放在培養(yǎng)皿上。

印后：

1. 在處理之前，讓您的打印結(jié)構(gòu)在通風(fēng)櫥中靜置至少 2 小時(shí)。請(qǐng)注意，打印件在洗滌前可以無(wú)限期地存放在密封的玻璃容器中;

2. 將打印的結(jié)構(gòu)浸入 70% 乙醇中至少 1 小時(shí)。建議輕柔攪拌。更換乙醇，讓您的物體再浸入水中一個(gè)小時(shí);

3. 用PBS（用于生物應(yīng)用的無(wú)菌PBS）代替乙醇，并立即使用。如果您想存儲(chǔ)此對(duì)象，請(qǐng)將其冷凍在 -20 ?C、– 40 ?C 或 -80 ?C;

4. 如果您沒(méi)有使用我們的盤子并且您的結(jié)構(gòu)與您的表面融合，請(qǐng)小心地使用剃須刀片將其取下。如果您確實(shí)使用過(guò)我們的盤子，只需戴上手套取下您的結(jié)構(gòu)即可;

5. 如果您愿意，您可以用剪刀、手術(shù)刀、活檢打孔機(jī)等切割您的指紋。

細(xì)胞接種：

1. 從打印的結(jié)構(gòu)中吸出多余的液體，但不要讓它干燥。細(xì)胞接種時(shí)應(yīng)略微濕潤(rùn);

2. 10-15 μL 應(yīng)接種在直徑 5 mm、厚 1 mm 的印刷構(gòu)建體中;

• 對(duì)于此應(yīng)用，建議以 5 x 10 的密度接種間充質(zhì)干細(xì)胞6細(xì)胞/mL。

3. 凝膠也可以注射到生物打印和洗滌的物體中。

打印設(shè)置

速度 （mm/s）	層高 （mm）	噴嘴直徑 （mm）	軌距	壓力 （psi）	打印溫度 （°C）
16	0.2	0.2	27	10-20	室溫

應(yīng)用

骨組織：天然骨骼封裝在神經(jīng)和肌肉組織中，因此將 3DG 與 HB 一起打印可能會(huì)產(chǎn)生多組織單元。

心臟、神經(jīng)和骨骼肌組織：3DG 非常適合需要導(dǎo)電的組織。由于其導(dǎo)電性，3DG可以傳輸對(duì)心臟、神經(jīng)和骨骼肌功能至關(guān)重要的電信號(hào)。

生物相容性和柔性電路：隨心所欲地打印電路，用細(xì)胞接種它們并運(yùn)行電流進(jìn)行刺激。

警告

• 請(qǐng)勿將液體形式的 3DG 存放在塑料容器中數(shù)小時(shí)，否則會(huì)變干。打印前盡量限制所有空氣暴露，以確保佳打印體驗(yàn);

• 使用比提供的針頭規(guī)格更高（噴嘴直徑更?。┑尼橆^進(jìn)行打印可能會(huì)導(dǎo)致間歇性堵塞;

• 不要讓液態(tài)3DG與黑色金屬長(zhǎng)時(shí)間接觸，它會(huì)腐蝕它們。也不要讓它與聚酯或聚苯乙烯接觸，它會(huì)與它們?nèi)诤稀?/p>

• 不要讓 3DG 達(dá)到 70 ?C 以上的溫度，否則會(huì)熔化。

• 不要試圖用熱、蒸汽、環(huán)氧乙烷或過(guò)氧化氫對(duì)打印結(jié)構(gòu)進(jìn)行滅菌。該材料含有二氯甲烷、2-丁氧基乙醇和鄰苯二甲酸二丁酯。

• 僅用于研究目的。不供人類或臨床使用。