純化胞外囊泡紅綠熒光雙標(biāo)記

FLUO-EV是穩(wěn)定表達(dá)熒光蛋白EGFP（綠色）和mCherry（紅色）與四泛蛋白CD63和CD9融合蛋白的胞外囊泡。FLUO-EV 是通過(guò)切向流過(guò)濾（TFF）和尺寸排阻色譜法（SEC）從基因工程細(xì)胞中純化出來(lái)的，以共同表達(dá) CD63-EGFP 和 CD9-mCherry。FLUO-EVs 顯示出熒光團(tuán)的高穩(wěn)定性，可用于體外跟蹤研究，或作為納米顆粒分析儀的參考材料，或用于檢測(cè)校準(zhǔn)。

細(xì)胞外囊泡（EVs）是一種脂質(zhì)膜結(jié)合的顆粒，通過(guò)傳遞生理過(guò)程所必需的調(diào)節(jié)分子參與細(xì)胞間的交流。由于細(xì)胞外囊泡能有效載運(yùn)特定的貨物分子，因此被認(rèn)為是治療藥物的合適載體。藥物可以通過(guò)主動(dòng)的外源策略或?qū)Ξa(chǎn)生囊泡的細(xì)胞進(jìn)行基因修飾來(lái)裝載到 EVs 中。為了生產(chǎn)輸送治療蛋白的EVs，我們對(duì)HEK293和腫瘤細(xì)胞進(jìn)行了基因改造和比較。在 HEK293 中，基于四聚碳酸酯的 RFP 融合蛋白更加穩(wěn)定，并優(yōu)先分選到 EV 中。從轉(zhuǎn)基因 HEK293 細(xì)胞介質(zhì)中分離出的 EV 被癌細(xì)胞捕獲，有效地運(yùn)送了它們的貨物。在 CD9/CD81 和 RFP 之間引入的 Cathepsin B 裂解位點(diǎn)被腫瘤特異性蛋白酶識(shí)別，使報(bào)告蛋白得以釋放。我們的研究結(jié)果表明，HEK293 細(xì)胞是產(chǎn)生 EVs 的系統(tǒng)，為開發(fā)納米平臺(tái)向腫瘤細(xì)胞高效遞送治療蛋白和原藥鋪平了道路。